| 摘要 | 第3-5页 |
| Summary | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-33页 |
| 1 玉米赤霉烯酮研究进展 | 第15-21页 |
| 1.1 玉米赤霉烯酮简介 | 第15-16页 |
| 1.2 玉米赤霉烯酮污染现状 | 第16-17页 |
| 1.3 玉米赤霉烯酮的代谢及其毒性 | 第17-19页 |
| 1.3.1 玉米赤霉烯酮的代谢 | 第17页 |
| 1.3.2 玉米赤霉烯酮的生殖毒性及其对养殖业的危害 | 第17-18页 |
| 1.3.3 玉米赤霉烯酮的细胞毒性及遗传毒性 | 第18-19页 |
| 1.3.4 玉米赤霉烯酮的免疫毒性 | 第19页 |
| 1.3.5 玉米赤霉烯酮对肿瘤发生的影响 | 第19页 |
| 1.4 玉米赤霉烯酮的限量标准 | 第19页 |
| 1.5 玉米赤霉烯酮检测方法 | 第19-21页 |
| 1.5.1 薄层色谱法 | 第20页 |
| 1.5.2 高效液相色谱法 | 第20页 |
| 1.5.3 免疫学检测方法 | 第20-21页 |
| 2 胶体金快速检测技术的研究进展 | 第21-31页 |
| 2.1 胶体金的制备 | 第21-22页 |
| 2.2 胶体金的标记 | 第22-24页 |
| 2.3 胶体金免疫渗滤的基本结构及检测原理 | 第24-25页 |
| 2.4 胶体金免疫层析试纸的基本结构及检测原理 | 第25-29页 |
| 2.4.1 胶体金免疫层析试纸的基本结构 | 第25-26页 |
| 2.4.2 胶体金免疫层析试纸检测原理 | 第26-29页 |
| 2.5 胶体金免疫层析试纸在兽医领域的应用 | 第29-31页 |
| 2.5.1 胶体金免疫层析试纸在动物疫病检测中的应用 | 第29-30页 |
| 2.5.2 胶体金免疫层析试纸在真菌毒素检测中的应用 | 第30页 |
| 2.5.3 胶体金免疫层析试纸在兽药残留检测中的应用 | 第30-31页 |
| 3 本研究的目的及意义 | 第31-33页 |
| 第二章 玉米赤霉烯酮人工抗原的合成及鉴定 | 第33-45页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| 1.1 试剂 | 第33页 |
| 1.2 主要溶液配方 | 第33页 |
| 1.3 仪器 | 第33-34页 |
| 1.4 实验动物 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-37页 |
| 2.1 1,4-丁二醇二缩水甘油醚法制备ZEN人工抗原 | 第34-35页 |
| 2.2 ZEN人工抗原的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.1 SDS-PAGE法鉴定ZEN人工抗原 | 第35-36页 |
| 2.2.2 UV鉴定ZEN人工抗原 | 第36页 |
| 2.3 ZEN人工抗原免疫学鉴定及融合小鼠的筛选 | 第36-37页 |
| 2.3.1 动物免疫 | 第36页 |
| 2.3.2 建立间接抑制ELISA方法鉴定小鼠多抗血清 | 第36-37页 |
| 3. 结果和分析 | 第37-40页 |
| 3.1 人工抗原的鉴定 | 第37-39页 |
| 3.1.1 UV鉴定ZEN人工抗原 | 第38页 |
| 3.1.2 SDS-PAGE鉴定结果 | 第38-39页 |
| 3.2 人工抗原免疫效果评价及融合小鼠筛选 | 第39-40页 |
| 3.2.1 小鼠血清中ZEN多克隆抗体（pAb）效价测定 | 第39页 |
| 3.2.2 小鼠血清中ZEN多克隆抗体（pAb）灵敏度的测定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| 4.1 人工抗原的制备 | 第40-41页 |
| 4.2 载体蛋白的选择 | 第41页 |
| 4.3 动物免疫 | 第41-42页 |
| 4.4 ELISA方法的选择 | 第42-43页 |
| 5 结论 | 第43-45页 |
| 第三章 玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定 | 第45-59页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| 1.1 试剂 | 第45页 |
| 1.2 溶液 | 第45-46页 |
| 1.3 仪器 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-51页 |
| 2.1 加强免疫 | 第46页 |
| 2.2 细胞融合 | 第46-47页 |
| 2.2.1 NS0细胞的准备 | 第46-47页 |
| 2.2.2 脾脏细胞的制备 | 第47页 |
| 2.2.3 细胞融合 | 第47页 |
| 2.3 杂交瘤细胞筛选 | 第47-49页 |
| 2.3.1 棋盘法确定筛选最佳包板浓度 | 第47-48页 |
| 2.3.2 杂交瘤细胞阳性孔筛选 | 第48页 |
| 2.3.3 杂交瘤细胞的冻存及复苏 | 第48页 |
| 2.3.4 饲养细胞的制备 | 第48-49页 |
| 2.3.5 杂交瘤细胞的克隆化 | 第49页 |
| 2.4 体内诱生法大量制备腹水 | 第49-50页 |
| 2.4.1 注射腹水小鼠准备 | 第49页 |
| 2.4.2 制备腹水 | 第49页 |
| 2.4.3 辛酸硫酸铵法纯化腹水 | 第49-50页 |
| 2.5 单克隆抗体性质鉴定 | 第50-51页 |
| 2.5.1 单克隆抗体亚型 | 第50页 |
| 2.5.2 单克隆抗体效价及灵敏度鉴定 | 第50页 |
| 2.5.3 单克隆抗体亲和力的测定 | 第50页 |
| 2.5.4 单克隆抗体特异性鉴定 | 第50-51页 |
| 3 结果和分析 | 第51-56页 |
| 3.1 杂交瘤细胞株筛选 | 第51-52页 |
| 3.1.1 最佳包被浓度确定 | 第51页 |
| 3.1.2 杂交瘤细胞筛选 | 第51-52页 |
| 3.1.3 腹水的制备 | 第52页 |
| 3.1.4 腹水的纯化 | 第52页 |
| 3.2 单克隆抗体免疫学特性鉴定 | 第52-56页 |
| 3.2.1 单克隆抗体亚型鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2.2 单克隆抗体效价及灵敏度鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2.3 抗体亲和力测定 | 第54-55页 |
| 3.2.4 单克隆抗体特异性鉴定 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 4.1 骨髓瘤细胞的选择 | 第56页 |
| 4.2 细胞融合条件选择 | 第56-57页 |
| 4.2.1 融合时间的选择 | 第56页 |
| 4.2.2 骨髓瘤细胞的准备 | 第56页 |
| 4.2.3 融合时饲养细胞的选择 | 第56-57页 |
| 4.2.4 融合方法的选择 | 第57页 |
| 4.2.5 关于选择性培养基 | 第57页 |
| 4.3 单抗的纯化 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 第四章 玉米赤霉烯酮ELISA快速检测试剂盒的研制 | 第59-71页 |
| 1 材料 | 第59-60页 |
| 1.1 试剂及溶液 | 第59页 |
| 1.2 仪器 | 第59-60页 |
| 2 方法 | 第60-62页 |
| 2.1 ELISA试剂盒最佳工艺的确定 | 第60页 |
| 2.1.1 最佳反应时间及抗体工作浓度的选择 | 第60页 |
| 2.1.2 ELISA试剂盒标准曲线的绘制及样品的检测方法 | 第60页 |
| 2.2 试剂盒性能的测定 | 第60-61页 |
| 2.2.1 试剂盒检测限 | 第60-61页 |
| 2.2.2 试剂盒检测范围 | 第61页 |
| 2.2.3 精密度 | 第61页 |
| 2.2.4 稳定性 | 第61页 |
| 2.3 谷物及饲料样品的检测 | 第61-62页 |
| 2.3.1 样品处理方法 | 第61-62页 |
| 3 结果和分析 | 第62-68页 |
| 3.1 试剂盒最佳反应时间及工作浓度 | 第62-63页 |
| 3.2 试剂盒标准曲线 | 第63页 |
| 3.3 试剂盒组装 | 第63-64页 |
| 3.4 试剂盒操作流程 | 第64页 |
| 3.5 试剂盒性能测定 | 第64-66页 |
| 3.5.1 试剂盒检测限 | 第64页 |
| 3.5.2 试剂盒检测范围 | 第64页 |
| 3.5.3 试剂盒精密度 | 第64-66页 |
| 3.5.4 试剂盒稳定性 | 第66页 |
| 3.6 谷物及饲料样品的检测 | 第66-68页 |
| 3.6.1 甲醇对试剂盒的影响 | 第66页 |
| 3.6.2 样品提取液浓度的确定 | 第66-67页 |
| 3.6.3 试剂盒检测谷物及饲料样品的准确度 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 4.1 ELISA方法的主要影响因素 | 第68-69页 |
| 4.1.1 抗体的性质 | 第68页 |
| 4.1.2 最佳包被浓度的确定 | 第68页 |
| 4.1.3 反应时间的优化 | 第68-69页 |
| 4.2 试剂盒的包装与保存 | 第69页 |
| 4.3 检测样品及样品提取方法的选择 | 第69页 |
| 5 结论 | 第69-71页 |
| 第五章 玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试纸的研制 | 第71-85页 |
| 1 材料 | 第71-72页 |
| 1.1 试剂 | 第71页 |
| 1.2 主要溶液配方 | 第71页 |
| 1.3 仪器 | 第71-72页 |
| 2 方法 | 第72-76页 |
| 2.1 胶体金的制备及鉴定 | 第72页 |
| 2.1.1 胶体金的制备 | 第72页 |
| 2.1.2 胶体金的鉴定 | 第72页 |
| 2.2 金标抗体的制备 | 第72-73页 |
| 2.2.1 金标抗体最佳pH的确定 | 第72-73页 |
| 2.2.2 抗体最佳标记量的确定 | 第73页 |
| 2.2.3 胶体金标记ZEN mAb | 第73页 |
| 2.3 试纸的组装 | 第73-74页 |
| 2.3.1 样品垫及金垫的处理 | 第73页 |
| 2.3.2 试纸的组装 | 第73页 |
| 2.3.3 NC膜喷膜浓度的确定及金标抗体条件的选择 | 第73-74页 |
| 2.4 试纸条的结果判定 | 第74页 |
| 2.4.1 试纸条半定量检测 | 第74页 |
| 2.4.2 试纸条的定量检测 | 第74页 |
| 2.5 样品的处理方法 | 第74-75页 |
| 2.6 试纸性能鉴定 | 第75页 |
| 2.6.1 试纸灵敏度测定 | 第75页 |
| 2.6.2 试纸准确性及精密度的测定 | 第75页 |
| 2.6.3 试纸稳定性检测 | 第75页 |
| 2.7 试纸条在天然样品检测中的应用 | 第75-76页 |
| 3 结果和分析 | 第76-83页 |
| 3.1 胶体金的鉴定 | 第76页 |
| 3.2 抗体最佳标记用量的确定 | 第76页 |
| 3.3 NC膜喷膜条件及金标抗体条件的确定 | 第76-79页 |
| 3.3.1 T线喷膜浓度的初探 | 第76-77页 |
| 3.3.2 T线喷膜浓度的确定及金标抗体pH值的确定 | 第77-78页 |
| 3.3.3 C线喷膜浓度及喷金量的确定 | 第78-79页 |
| 3.4 试纸性能的鉴定 | 第79-83页 |
| 3.4.1 试纸目测灵敏度的测定 | 第79页 |
| 3.4.2 ZEN试纸定量灵敏度 | 第79-81页 |
| 3.4.3 试纸的准确性及精密度 | 第81页 |
| 3.4.4 试纸的稳定性 | 第81-82页 |
| 3.4.5 对比不同方法检测天然玉米样品中ZEN | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-84页 |
| 4.1 胶体金制备的注意事项 | 第83页 |
| 4.1.1 胶体金制备材料及器皿的影响 | 第83页 |
| 4.1.2 还原剂浓度对胶体金制备的影响 | 第83页 |
| 4.2 金标抗体保存液的配置原则 | 第83-84页 |
| 4.2.1 合适的缓冲液 | 第83页 |
| 4.2.2 大分子物质 | 第83页 |
| 4.2.3 糖类 | 第83-84页 |
| 4.2.4 表面活性剂 | 第84页 |
| 4.3 样品处理方法的选择 | 第84页 |
| 5 结论 | 第84-85页 |
| 第六章 同步检测赭曲霉毒素A及玉米赤霉烯酮的胶体金免疫层析试纸的研制 | 第85-96页 |
| 1 材料 | 第85-86页 |
| 1.1 试剂 | 第85页 |
| 1.2 主要溶液配方 | 第85页 |
| 1.3 仪器 | 第85-86页 |
| 2 方法 | 第86-89页 |
| 2.1 二联试纸最优条件的探索 | 第86页 |
| 2.1.1 胶体金标记mAb | 第86页 |
| 2.1.2 NC膜喷膜浓度及试纸缓冲系统的确定 | 第86页 |
| 2.2 试纸的组装 | 第86-87页 |
| 2.3 二联试纸结果判定 | 第87页 |
| 2.3.1 二联试纸半定量检测结果判定 | 第87页 |
| 2.3.2 二联试纸条定量检测结果判定 | 第87页 |
| 2.4 样品的处理方法 | 第87-88页 |
| 2.5 二联试纸性能鉴定 | 第88页 |
| 2.5.1 二联试纸灵敏度测定 | 第88页 |
| 2.5.2 二联试纸准确性及精密度的测定 | 第88页 |
| 2.5.3 二联试纸稳定性检测 | 第88页 |
| 2.6 二联试纸检测天然样品 | 第88-89页 |
| 3 结果和分析 | 第89-94页 |
| 3.1 二联试纸最优条件 | 第89-91页 |
| 3.1.1 金标mAb最优标记条件 | 第89页 |
| 3.1.2 二联试纸喷膜浓度及试纸缓冲系统的确定 | 第89-91页 |
| 3.2 二联试纸性能测定 | 第91-94页 |
| 3.2.1 二联试纸目测灵敏度的测定 | 第91页 |
| 3.2.2 二联试纸定量灵敏度 | 第91-92页 |
| 3.2.3 二联试纸的准确性及精密度 | 第92-93页 |
| 3.2.4 试纸的稳定性 | 第93页 |
| 3.2.5 对比不同方法检测天然样品中OTA及ZEN | 第93-94页 |
| 4 讨论 | 第94页 |
| 5 结论 | 第94-96页 |
| 研究结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 导师简介 | 第108-109页 |
| 个人简介 | 第109-111页 |
