| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩略词 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·ATP5B(F_1F_0-ATP synthase beta subunit) | 第13-17页 |
| ·F_1F_0-ATP 合成酶结构 | 第13页 |
| ·ATP5B 参与的生物学现象 | 第13-17页 |
| ·单克隆抗体 | 第17-23页 |
| ·单克隆抗体技术原理 | 第17-18页 |
| ·单克隆抗体制备方法 | 第18-19页 |
| ·单克隆抗体生产方法 | 第19页 |
| ·单克隆抗体的改造 | 第19-21页 |
| ·单克隆抗体的主要应用 | 第21-23页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 基因工程制备抗原及鉴定 | 第24-38页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·实验所用的质粒、菌株 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-31页 |
| ·质粒pET-28a(+)-atp5b 和pET-32a(+)的提取(SDS 碱性裂解法) | 第25页 |
| ·PCR 扩增atp5b 基因 | 第25-26页 |
| ·表达载体pET-32a(+)-atp5b 的构建 | 第26-28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·ATP5B-Trx、ATP5B 蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·ATP5B-Trx、ATP5B 蛋白的纯化 | 第30页 |
| ·ATP5B-Trx、ATP5B 蛋白的SDS-PAGE 电泳分析 | 第30-31页 |
| ·ATP5B-Trx、ATP5B 蛋白的浓度测定(考马斯亮蓝染色法) | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-36页 |
| ·重组质粒pET-32a(+)-atp5b 的构建 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pET-32a(+)-atp5b 的验证 | 第32-33页 |
| ·ATP5B-Trx 和ATP5B 蛋白在E. coli BL21(DE3)中的表达和纯化 | 第33-35页 |
| ·ATP5B-Trx、ATP5B 蛋白的浓度测定 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| ·结论 | 第37-38页 |
| 第三章 抗ATP5B 单克隆抗体细胞株的制备 | 第38-64页 |
| ·材料 | 第38-41页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·实验动物及细胞 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·主要试剂配制 | 第39-41页 |
| ·方法 | 第41-48页 |
| ·小鼠免疫 | 第41页 |
| ·筛选体系的建立(间接非竞争ELISA 法) | 第41-42页 |
| ·小鼠血清效价的测定 | 第42-43页 |
| ·小鼠血清特异性的检测 | 第43-44页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体细胞株的制备 | 第44-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-61页 |
| ·抗原乳化及小鼠免疫 | 第48-49页 |
| ·筛选体系的建立(间接非竞争ELISA 法) | 第49-52页 |
| ·小鼠血清效价的测定 | 第52-54页 |
| ·小鼠血清特异性的检测 | 第54-55页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体细胞株的制备 | 第55-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·小鼠免疫 | 第61-62页 |
| ·ELISA 筛选体系的构建 | 第62页 |
| ·细胞融合及筛选 | 第62-63页 |
| ·细胞克隆 | 第63页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| 第四章 抗ATP5B 单克隆抗体的纯化及性质鉴定 | 第64-76页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·实验动物及细胞 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-69页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体效价测定 | 第64-65页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体的制备 | 第65页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体的纯化 | 第65-66页 |
| ·SDS-PAGE 分析单克隆抗体 | 第66页 |
| ·腹水抗体的浓度测定 | 第66页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体亚类鉴定 | 第66-67页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体特异性分析 | 第67页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体亲和力的测定 | 第67-68页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第68-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-73页 |
| ·细胞培养上清液效价 | 第69页 |
| ·SDS-PAGE 分析单克隆抗体 | 第69-70页 |
| ·腹水效价及抗体浓度的测定 | 第70页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体亚类鉴定 | 第70-71页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体特异性分析 | 第71-72页 |
| ·抗ATP5B 单克隆抗体亲和力的测定 | 第72-73页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| ·抗体制备 | 第73页 |
| ·抗体纯化 | 第73-74页 |
| ·抗体特异性 | 第74-75页 |
| ·抗体亲和力常数 | 第75页 |
| ·结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 发表的学术论文及其他成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |