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抗ATP5B单克隆抗体制备及其性质研究

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
英文缩略词第11-13页
第一章 文献综述第13-24页
   ·ATP5B(F_1F_0-ATP synthase beta subunit)第13-17页
     ·F_1F_0-ATP 合成酶结构第13页
     ·ATP5B 参与的生物学现象第13-17页
   ·单克隆抗体第17-23页
     ·单克隆抗体技术原理第17-18页
     ·单克隆抗体制备方法第18-19页
     ·单克隆抗体生产方法第19页
     ·单克隆抗体的改造第19-21页
     ·单克隆抗体的主要应用第21-23页
   ·本研究的目的及意义第23-24页
第二章 基因工程制备抗原及鉴定第24-38页
   ·材料第24-25页
     ·主要试剂第24页
     ·主要仪器第24页
     ·实验所用的质粒、菌株第24-25页
   ·方法第25-31页
     ·质粒pET-28a(+)-atp5b 和pET-32a(+)的提取(SDS 碱性裂解法)第25页
     ·PCR 扩增atp5b 基因第25-26页
     ·表达载体pET-32a(+)-atp5b 的构建第26-28页
     ·重组质粒的鉴定第28-29页
     ·ATP5B-Trx、ATP5B 蛋白的诱导表达第29-30页
     ·ATP5B-Trx、ATP5B 蛋白的纯化第30页
     ·ATP5B-Trx、ATP5B 蛋白的SDS-PAGE 电泳分析第30-31页
     ·ATP5B-Trx、ATP5B 蛋白的浓度测定(考马斯亮蓝染色法)第31页
   ·结果与分析第31-36页
     ·重组质粒pET-32a(+)-atp5b 的构建第31-32页
     ·重组质粒pET-32a(+)-atp5b 的验证第32-33页
     ·ATP5B-Trx 和ATP5B 蛋白在E. coli BL21(DE3)中的表达和纯化第33-35页
     ·ATP5B-Trx、ATP5B 蛋白的浓度测定第35-36页
   ·讨论第36-37页
   ·结论第37-38页
第三章 抗ATP5B 单克隆抗体细胞株的制备第38-64页
   ·材料第38-41页
     ·主要试剂第38页
     ·实验动物及细胞第38页
     ·主要仪器第38-39页
     ·主要试剂配制第39-41页
   ·方法第41-48页
     ·小鼠免疫第41页
     ·筛选体系的建立(间接非竞争ELISA 法)第41-42页
     ·小鼠血清效价的测定第42-43页
     ·小鼠血清特异性的检测第43-44页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体细胞株的制备第44-48页
   ·结果与分析第48-61页
     ·抗原乳化及小鼠免疫第48-49页
     ·筛选体系的建立(间接非竞争ELISA 法)第49-52页
     ·小鼠血清效价的测定第52-54页
     ·小鼠血清特异性的检测第54-55页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体细胞株的制备第55-61页
   ·讨论第61-63页
     ·小鼠免疫第61-62页
     ·ELISA 筛选体系的构建第62页
     ·细胞融合及筛选第62-63页
     ·细胞克隆第63页
   ·结论第63-64页
第四章 抗ATP5B 单克隆抗体的纯化及性质鉴定第64-76页
   ·材料第64页
     ·主要试剂第64页
     ·实验动物及细胞第64页
     ·主要仪器第64页
   ·方法第64-69页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体效价测定第64-65页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体的制备第65页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体的纯化第65-66页
     ·SDS-PAGE 分析单克隆抗体第66页
     ·腹水抗体的浓度测定第66页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体亚类鉴定第66-67页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体特异性分析第67页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体亲和力的测定第67-68页
     ·杂交瘤细胞的冻存和复苏第68-69页
   ·结果与分析第69-73页
     ·细胞培养上清液效价第69页
     ·SDS-PAGE 分析单克隆抗体第69-70页
     ·腹水效价及抗体浓度的测定第70页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体亚类鉴定第70-71页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体特异性分析第71-72页
     ·抗ATP5B 单克隆抗体亲和力的测定第72-73页
     ·杂交瘤细胞的冻存和复苏第73页
   ·讨论第73-75页
     ·抗体制备第73页
     ·抗体纯化第73-74页
     ·抗体特异性第74-75页
     ·抗体亲和力常数第75页
   ·结论第75-76页
参考文献第76-80页
发表的学术论文及其他成果第80-81页
致谢第81页

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