| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 引言 | 第14-18页 |
| 第一节 片仔癀对大肠癌细胞生长的影响和对miR-34c及其靶基因的调控作用研究 | 第18-34页 |
| 1 实验材料与方法 | 第18-27页 |
| 1.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 1.1.1 药物和细胞株 | 第18页 |
| 1.1.2 试剂 | 第18-19页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第19页 |
| 1.2 实验方法 | 第19-26页 |
| 1.2.1 常用试剂的配制 | 第19-20页 |
| 1.2.2 细胞培养 | 第20页 |
| 1.2.3 皮下移植瘤模型检测片仔癀干预对大肠癌细胞瘤体生长的影响 | 第20-21页 |
| 1.2.4 MTT检测片仔癀干预对大肠癌细胞活力的影响 | 第21页 |
| 1.2.5 集落形成实验检测片仔癀干预对大肠癌细胞存活能力的影响 | 第21页 |
| 1.2.6 PI染色和流式细胞仪检测片仔癀干预对大肠癌细胞周期的影响 | 第21-22页 |
| 1.2.7 Q-PCR检测片仔癀干预对大肠癌细胞miR-34c-5p表达的影响 | 第22-24页 |
| 1.2.8 Q-PCR检测片仔癀干预对大肠癌细胞c-Myc、CyclinD1和CDK4表达的影响 | 第24-26页 |
| 1.2.9 Western-blot检测片仔癀干预对大肠癌细胞c-Myc、CyclinD1和CDK4表达的影响 | 第26页 |
| 1.3 数据分析与统计 | 第26-27页 |
| 2 实验结果 | 第27-33页 |
| 2.1 片仔癀干预对大肠癌细胞体内外生长的影响 | 第27-31页 |
| 2.1.1 片仔癀抑制HT-29皮下移植瘤的生长 | 第27-28页 |
| 2.1.2 片仔癀干预降低大肠癌细胞活力 | 第28-29页 |
| 2.1.3 片仔癀干预抑制大肠癌细胞的存活能力 | 第29-30页 |
| 2.1.4 片仔癀干预阻滞大肠癌细胞周期 | 第30-31页 |
| 2.2 片仔癀干预对miR-34c-5p及其靶基因表达的影响 | 第31-33页 |
| 2.2.1 片仔癀干预显著上调大肠癌细胞miR-34c-5p的表达 | 第31页 |
| 2.2.2 片仔癀干预下调大肠癌细胞c-Myc、CDK4和CyclinD1在mRNA和蛋白水平的表达 | 第31-33页 |
| 3 结论 | 第33-34页 |
| 第二节 片仔癀对大肠癌转移和对TGF-β/miR-200/ZEB1通路的影响 | 第34-58页 |
| 1 实验材料与方法 | 第34-44页 |
| 1.1 实验材料 | 第34-36页 |
| 1.1.1 药物和细胞株 | 第34页 |
| 1.1.2 试剂 | 第34-35页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第35-36页 |
| 1.2 实验方法 | 第36-43页 |
| 1.2.1 常用试剂的配制 | 第36-37页 |
| 1.2.2 细胞培养 | 第37页 |
| 1.2.3 划痕实验检测片仔癀干预对HCT-8和HCT116细胞的迁移的影响 | 第37页 |
| 1.2.4 Transwell实验检测片仔癀干预对HCT-8和HCT116细胞迁移的影响 | 第37-38页 |
| 1.2.5 Transwell实验检测片仔癀干预对HCT-8和HCT116细胞侵袭的影响 | 第38-39页 |
| 1.2.6 慢病毒感染和嘌呤霉素筛选构建荧光素酶标记的大肠癌细胞株 | 第39-40页 |
| 1.2.7 盲肠粘膜显微注射HCT116/luc细胞构建大肠癌原位移植瘤模型及片仔癀干预 | 第40页 |
| 1.2.8 片仔癀干预对HCT116原位移植瘤生长和转移的影响 | 第40-41页 |
| 1.2.9 HE染色验证原位移植瘤和转移瘤的病理学改变 | 第41页 |
| 1.2.10 倒置显微镜观察不同浓度5-FU干预后HCT-8和HCT-8/5-FU细胞的生长及MTT检测细胞活力 | 第41-42页 |
| 1.2.11 Transwell实验检测HCT-8和HCT-8/5-FU细胞及片仔癀干预后细胞迁移和侵袭能力改变 | 第42页 |
| 1.2.12 Western-blot检测片仔癀对TGF-1 β通路中相关基因表达的影响 | 第42-43页 |
| 1.2.13 Q-PCR检测片仔癀干预对HCT-8和HCT-8/5-FU细胞miR-200a、miR-200b和miR-200c表达的影响 | 第43页 |
| 1.3 数据统计分析 | 第43-44页 |
| 2 实验结果 | 第44-57页 |
| 2.1 片仔癀对大肠癌细胞体内外转移的影响 | 第44-50页 |
| 2.1.1 片仔癀干预抑制HCT-8和HCT116细胞的划痕后迁移 | 第44-45页 |
| 2.1.2 片仔癀干预抑制HCT-8和HCT116细胞小室中迁移 | 第45-46页 |
| 2.1.3 片仔癀干预显著抑制HCT-8和HCT116细胞的侵袭 | 第46-47页 |
| 2.1.4 成功筛选耐嘌呤霉素干预的HCT116/luc细胞 | 第47页 |
| 2.1.5 片仔癀干预显著降低HCT116细胞原位移植瘤的荧光强度和转移 | 第47-48页 |
| 2.1.6 片仔癀干预降低原位移植瘤的重量和转移 | 第48-50页 |
| 2.2 片仔癀对HCT-8/5-FU细胞转移的影响和对TGF-β /miR-200/ZEB1信号通路的调控作用 | 第50-57页 |
| 2.2.1 HCT-8/5-FU细胞耐药性和高转移能力验证 | 第50-52页 |
| 2.2.2 片仔癀干预抑制HCT-8/5-FU细胞划痕后的迁移能力 | 第52页 |
| 2.2.3 片仔癀干预抑制HCT-8/5-FU细胞迁移能力 | 第52-54页 |
| 2.2.4 片仔癀干预抑制HCT-8/5-FU细胞侵袭能力 | 第54-55页 |
| 2.2.5 片仔癀干预显著抑制HCT-8和HCT-8/5-FU细胞TGF-β 1通路 | 第55页 |
| 2.2.6 片仔癀干预显著上调HCT-8和HCT-8/5-FU细胞miR-200a、miR-200b和miR-200c的表达 | 第55-57页 |
| 3 结论 | 第57-58页 |
| 第三节 PNO1对大肠癌细胞生长的影响及片仔癀的干预作用 | 第58-86页 |
| 1 实验材料与方法 | 第58-70页 |
| 1.1 实验材料 | 第58-60页 |
| 1.1.1 药物和细胞株 | 第58页 |
| 1.1.2 试剂 | 第58-59页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第59-60页 |
| 1.2 实验方法 | 第60-69页 |
| 1.2.1 常用试剂的配制 | 第60页 |
| 1.2.2 细胞培养 | 第60页 |
| 1.2.3 大肠癌临床样本收集 | 第60-61页 |
| 1.2.4 基因芯片检测癌组织和癌旁组织中基因的差异表达 | 第61-62页 |
| 1.2.5 Q-PCR检测大肠癌组织和癌旁组织中PNO1的表达 | 第62页 |
| 1.2.6 Western-blot检测大肠癌组织和癌旁组织中PNO1的表达 | 第62页 |
| 1.2.7 免疫组化检测大肠癌癌组织和癌旁组织中PNO1的表达 | 第62-63页 |
| 1.2.8 TCGA数据库分析PNO1在大肠癌样本中的表达 | 第63页 |
| 1.2.9 Q-PCR和Western-blot检测不同大肠癌细胞和正常肠上皮细胞中PNO1的表达 | 第63-64页 |
| 1.2.10 免疫组化检测大肠癌组织芯片中PNO1表达及其与生存期的相关性分析 | 第64页 |
| 1.2.11 包被有sh-PNO1的慢病毒感染对大肠癌细胞PNO1表达的影响 | 第64-65页 |
| 1.2.12 高内涵(HCS)检测PNO1沉默对细胞生长的影响 | 第65页 |
| 1.2.13 皮下移植瘤模型评价PNO1沉默对瘤体生长的影响 | 第65-66页 |
| 1.2.14 CCK-8检测PNO1沉默对细胞活力的影响 | 第66页 |
| 1.2.15 集落形成实验检测PNO1沉默对细胞存活能力的影响 | 第66页 |
| 1.2.16 PI染色和流式细胞仪检测PNO1沉默对细胞周期的影响 | 第66-67页 |
| 1.2.17 AnnexinV-APC染色和FACS检测PNO1沉默对细胞凋亡的影响 | 第67页 |
| 1.2.18 比色法检测PNO1沉默对细胞Caspase-9和Caspase-3活性的影响 | 第67页 |
| 1.2.19 基因芯片检测PNO1沉默对下游相关基因表达的影响 | 第67-68页 |
| 1.2.20 QPCR验证芯片中基因的差异表达 | 第68页 |
| 1.1.21 Pathway分析研究PNO1沉默对相关通路的影响 | 第68页 |
| 1.2.22 Western-blot检测PNO1沉默对p53及其下游p21表达的影响 | 第68页 |
| 1.2.23 Q-PCR检测片仔癀干预对PNO1在mRNA水平表达的影响 | 第68-69页 |
| 1.2.24 Western-blot检测片仔癀干预对PNO1在蛋白水平表达的影响 | 第69页 |
| 1.3 数据分析与统计 | 第69-70页 |
| 2 实验结果 | 第70-85页 |
| 2.1 PNO1在大肠癌样本中的差异表达、临床意义及其生物学功能的研究 | 第70-84页 |
| 2.1.1 大肠癌癌组织和癌旁组织差异表达基因 | 第70-71页 |
| 2.1.2 大肠癌组织中PNO1在mRNA水平的表达显著高于癌旁组织 | 第71-72页 |
| 2.1.3 大肠癌组织中PNO1在蛋白水平的表达显著髙于癌旁组织 | 第72-73页 |
| 2.1.4 PNO1在多数大肠癌细胞株中的表达显著上调 | 第73-74页 |
| 2.1.5 PNO1高表达与大肠癌患者生存期短密切相关 | 第74-75页 |
| 2.1.6 包被有sh-PNO1的慢病毒感染下调大肠癌细胞PNO1表达 | 第75-76页 |
| 2.1.7 PNO1沉默抑制大肠癌细胞体外生长 | 第76-77页 |
| 2.1.8 PNO1沉默抑制大肠癌细胞体内生长 | 第77-78页 |
| 2.1.9 PNO1沉默抑制大肠癌细胞活力 | 第78-79页 |
| 2.1.10 PNO1沉默抑制大肠癌细胞存活能力 | 第79页 |
| 2.1.11 PNO1沉默阻滞大肠癌细胞周期 | 第79-80页 |
| 2.1.12 PNO1沉默诱导大肠癌细胞凋亡 | 第80-82页 |
| 2.1.13 PNO1沉默调控多个细胞凋亡增殖相关基因表达 | 第82-83页 |
| 2.2.14 PNO1沉默显著上调p53和p21的表达 | 第83-84页 |
| 2.2 片仔癀干预下调大肠癌细胞PNO1在mRNA和蛋白水平的表达 | 第84-85页 |
| 3 结论 | 第85-86页 |
| 讨论 | 第86-91页 |
| 参考文献 | 第91-96页 |
| 文献综述 | 第96-105页 |
| 参考文献 | 第102-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 作者简历 | 第107-110页 |
