| 中文摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 引言 | 第15-33页 |
| 1.1 木质纤维素与纤维素酶 | 第16-21页 |
| 1.1.1 木质纤维素 | 第16-17页 |
| 1.1.2 纤维素酶 | 第17-18页 |
| 1.1.3 溶解性多糖单加氧酶 | 第18-21页 |
| 1.2 纤维素酶的表达调控与胞外蛋白分泌 | 第21-26页 |
| 1.2.1 纤维素酶的诱导表达调控研究进展 | 第21-22页 |
| 1.2.2 蛋白质的分泌 | 第22-23页 |
| 1.2.3 衔接蛋白复合体概述 | 第23-26页 |
| 1.3 产纤维素酶的微生物 | 第26-31页 |
| 1.3.1 里氏木霉Trichoderma reesei RUT-C30 | 第27-28页 |
| 1.3.2 粗糙脉孢菌Neurospora crassa | 第28-31页 |
| 1.3.3 嗜热真菌毁丝霉Myceliophthora thermophila | 第31页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第31-33页 |
| 第2章 AP-3 在粗糙脉孢菌纤维素酶分泌中的作用 | 第33-71页 |
| 2.1 材料与方法 | 第33-50页 |
| 2.1.1 实验仪器与生化试剂 | 第33-35页 |
| 2.1.2 实验用菌株、质粒及引物 | 第35-37页 |
| 2.1.3 培养基及主要试剂配制 | 第37-38页 |
| 2.1.4 N. crassa培养条件 | 第38-39页 |
| 2.1.5 双突变体构建 | 第39-40页 |
| 2.1.6 同源基因获得及系统发育树构建 | 第40页 |
| 2.1.7 RNA提取与纯化 | 第40-42页 |
| 2.1.8 qRT-PCR与cDNA合成 | 第42-43页 |
| 2.1.9 ΔNcap3m菌株的回补 | 第43-47页 |
| 2.1.10 NcAP3m–EGFP的亚细胞定位 | 第47页 |
| 2.1.11 蛋白及酶活测定 | 第47-50页 |
| 2.1.12 数据分析处理 | 第50页 |
| 2.2 结果与分析 | 第50-64页 |
| 2.2.1 N. crassa突变体筛选 | 第50-55页 |
| 2.2.2 Ncap3m编码N. crassa的AP-3 复合体的 μ 亚基 | 第55-56页 |
| 2.2.3 Ncap3m与纤维素酶分泌相关 | 第56-58页 |
| 2.2.4 Ncap3b同样可以影响N. crassa的蛋白分泌 | 第58-59页 |
| 2.2.5 碱性磷酸酶影响纤维素酶的分泌 | 第59-61页 |
| 2.2.6 N. crassa中NcAP3m蛋白的亚细胞定位 | 第61-62页 |
| 2.2.7 AP-3 复合体影响纤维素酶基因的转录水平 | 第62-64页 |
| 2.3 讨论 | 第64-69页 |
| 2.4 小结 | 第69-71页 |
| 第3章 内切纤维素酶AgCel5A、β-葡萄糖苷酶NcBGL2的表达及酶学性质分析 | 第71-101页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第71-83页 |
| 3.1.1 实验仪器与生化试剂 | 第71页 |
| 3.1.2 实验用菌株、质粒及引物 | 第71-72页 |
| 3.1.3 培养基及主要试剂配制 | 第72-73页 |
| 3.1.4 RNA提取、纯化与cDNA合成 | 第73页 |
| 3.1.5 基因分子克隆 | 第73-76页 |
| 3.1.6 P. pastoris蛋白诱导表达 | 第76页 |
| 3.1.7 蛋白纯化 | 第76-77页 |
| 3.1.8 SDS-PAGE及去糖基化分析 | 第77页 |
| 3.1.9 AgCel5A酶学性质分析 | 第77-80页 |
| 3.1.10 NcBGL2酶学性质分析 | 第80-82页 |
| 3.1.11 Ag Cel5A与NcBGL2水解纤维素过程中的酶系配比 | 第82页 |
| 3.1.12 数据分析处理 | 第82-83页 |
| 3.2 结果与分析 | 第83-98页 |
| 3.2.1 AgCel5A的表达与性质分析 | 第83-89页 |
| 3.2.2 NcBGL2的表达与性质分析 | 第89-97页 |
| 3.2.3 Avicel水解酶系配比确定 | 第97-98页 |
| 3.3 讨论 | 第98-100页 |
| 3.4 小结 | 第100-101页 |
| 第4章 嗜热毁丝霉LPMO蛋白的表达与酶学性质分析 | 第101-131页 |
| 4.1 材料与方法 | 第101-110页 |
| 4.1.1 实验仪器与生化试剂 | 第101页 |
| 4.1.2 实验用菌株、质粒及引物 | 第101-103页 |
| 4.1.3 培养基及主要试剂配制 | 第103-104页 |
| 4.1.4 RNA提取与纯化 | 第104页 |
| 4.1.5 qRT-PCR与cDNA合成 | 第104页 |
| 4.1.6 基因分子克隆 | 第104-105页 |
| 4.1.7 P. pastoris蛋白诱导表达及纯化 | 第105页 |
| 4.1.8 SDS-PAGE及去糖基化分析 | 第105-106页 |
| 4.1.9 Western blot分析 | 第106页 |
| 4.1.10 蛋白及酶活测定 | 第106-107页 |
| 4.1.11 LPMOs活性测定 | 第107-110页 |
| 4.1.12 数据分析处理 | 第110页 |
| 4.2 结果与分析 | 第110-127页 |
| 4.2.1 M. thermophila中AA9家族基因表达水平分析 | 第110-111页 |
| 4.2.2 MtLPMO9A、Mt LPMO9B的氨基酸序列分析 | 第111-112页 |
| 4.2.3 lpmo基因的克隆及重组转化子的筛选 | 第112-114页 |
| 4.2.4 MtLPMO9A与MtLPMO9B的表达纯化 | 第114-115页 |
| 4.2.5 MtLPMO9A和MtLPMO9B与底物结合能力的测定 | 第115-117页 |
| 4.2.6 MtLPMO9A和MtLPMO9B水解活性分析 | 第117-119页 |
| 4.2.7 EDTA处理对MtLPMO9A和MtLPMO9B活性的影响 | 第119-120页 |
| 4.2.8 金属离子对Mt LPMO9A和MtLPMO9B活性的影响 | 第120-122页 |
| 4.2.9 LPMO蛋白与纤维素酶的协同作用 | 第122-124页 |
| 4.2.10 LPMO蛋白在N. crassa中的表达 | 第124-125页 |
| 4.2.11 重组菌株纤维素酶系变化 | 第125-127页 |
| 4.3 讨论 | 第127-129页 |
| 4.4 小结 | 第129-131页 |
| 第5章 结论 | 第131-133页 |
| 参考文献 | 第133-153页 |
| 作者简介 | 第153页 |
| 在学期间所获得的科研成果 | 第153-155页 |
| 致谢 | 第155-156页 |
