中文摘要 | 第8-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
1 前言 | 第11-18页 |
1.1 种子主要储藏物质积累过程 | 第11-12页 |
1.2 植物油脂的生物合成途径 | 第12-13页 |
1.3 甘油3磷酸酰基转移酶基因(GPAT)的研究进展 | 第13-14页 |
1.4 溶血磷脂酸酰基转移酶基因(LPAAT)的研究进展 | 第14-16页 |
1.5 二酰甘油酰基转移酶基因(DGAT)的研究进展 | 第16-17页 |
1.6 花生基因组研究进展 | 第17-18页 |
1.7 研究目的与意义 | 第18页 |
2 材料与方法 | 第18-29页 |
2.1 材料 | 第18-19页 |
2.1.1 植物材料 | 第18页 |
2.1.2 主要试剂及质粒菌株 | 第18-19页 |
2.2 试验方法 | 第19-29页 |
2.2.1 花生种子含油量的测定 | 第19页 |
2.2.2 取样方法 | 第19-20页 |
2.2.3 籽仁RNA提取及cDNA合成 | 第20-21页 |
2.2.4 总RNA及其逆转录产物的检测 | 第21-22页 |
2.2.5 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)引物设计与筛选 | 第22-23页 |
2.2.6 花生GPAT9、LPAAT、DGAT1-2cDNA序列的PCR扩增 | 第23-24页 |
2.2.7 PCR产物的胶回收 | 第24页 |
2.2.8 目的片段与pEASY-T1载体连接并转化大肠杆菌 | 第24-25页 |
2.2.9 取阳性重组子测序 | 第25-26页 |
2.2.10 qRT-PCR反应及数据处理 | 第26页 |
2.2.11 花生GPAT9基因的遗传转化 | 第26-29页 |
2.2.11.1GPAT9与RGPAT9基因转化花生及PPT抗性苗的获得 | 第26-27页 |
2.2.11.2 抗性苗的PCR鉴定 | 第27-29页 |
2.2.11.3 转基因植株的移栽 | 第29页 |
3 结果与分析 | 第29-68页 |
3.1 花生种子含油量的分析 | 第29-35页 |
3.2 籽仁总RNA及cDNA的电泳检测 | 第35-36页 |
3.3 荧光定量PCR特异性引物筛选 | 第36-40页 |
3.3.1 GPAT9特异引物筛选 | 第36页 |
3.3.2 LPAAT特异引物筛选 | 第36-37页 |
3.3.3 DGAT1-2 的引物筛选 | 第37-38页 |
3.3.4 内参基因的引物筛选 | 第38-40页 |
3.4 不同含油量花生品种酰基转移酶基因的表达分析 | 第40-61页 |
3.4.1 不同含油量花生品种GPAT9表达特征分析 | 第40-47页 |
3.4.2 不同含油量花生品种LPAAT表达特征分析 | 第47-53页 |
3.4.3 不同含油量花生品种DGAT1-2 表达特征分析 | 第53-59页 |
3.4.4 不同亚基因组酰基转移酶基因表达丰度分析 | 第59-61页 |
3.5 种质资源含油量与酰基转移酶基因表达的相关性分析 | 第61-63页 |
3.5.1 单个酰基转移酶基因表达量与含油量的相关性分析 | 第61-62页 |
3.5.2 DGAT1-2 与GPAT9、LPAAT表达量比值与种子含油量的相关性分析 | 第62-63页 |
3.6 基因表达数据的主成分分析 | 第63-66页 |
3.6.1 R4期基因表达数据的主成分分析 | 第63-64页 |
3.6.2 R5期基因表达数据的主成分分析 | 第64-65页 |
3.6.3 R6期基因表达数据的主成分分析 | 第65-66页 |
3.7 花生GPAT9与RGPAT9基因的遗传转化 | 第66-68页 |
3.7.1 GPAT9与RGPAT9基因转化花生及PPT抗性苗的获得 | 第66-67页 |
3.7.2 抗性苗的PCR鉴定 | 第67-68页 |
4 讨论 | 第68-70页 |
4.1 本研究取样时期设计问题 | 第68页 |
4.2 品种(系)间含油量差异的重要原因 | 第68-69页 |
4.3 三类酰基转移酶基因在花生亚基因组中表达特性分析 | 第69-70页 |
5 结论 | 第70-71页 |
参考文献 | 第71-78页 |
附录 | 第78-82页 |
致谢 | 第82页 |