鼠李糖脂减毒高产菌株的构建和盐霉素基因簇salBⅢ基因功能研究
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略词 | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-29页 |
| 1.1 鼠李糖脂 | 第15-20页 |
| 1.1.1 表面活性剂概述 | 第15页 |
| 1.1.2 生物表面活性剂概述 | 第15-17页 |
| 1.1.3 鼠李糖脂的结构 | 第17页 |
| 1.1.4 鼠李糖脂生物合成及其调控 | 第17-18页 |
| 1.1.5 鼠李糖脂的应用 | 第18-19页 |
| 1.1.6 鼠李糖脂的发酵条件 | 第19页 |
| 1.1.7 提高鼠李糖脂产量的方法 | 第19页 |
| 1.1.8 鼠李糖脂提取和检测方法 | 第19-20页 |
| 1.1.9 减毒PAO1 | 第20页 |
| 1.2 盐霉素 | 第20-22页 |
| 1.2.1 盐霉素基本概述 | 第20-22页 |
| 1.3 Red/ET重组工程 | 第22-27页 |
| 1.3.1 Red/ET同源重组 | 第22-23页 |
| 1.3.2 位点特异性重组 | 第23-24页 |
| 1.3.3 温敏型质粒 | 第24页 |
| 1.3.4 DNA定点突变和无痕修饰 | 第24-27页 |
| 1.4 立题依据 | 第27-29页 |
| 第二章 鼠李糖脂减毒高产菌株的构建 | 第29-42页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-32页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第29页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.3 培养基 | 第30页 |
| 2.2.4 菌株质粒 | 第30-31页 |
| 2.2.5 抗生素和寡核苷酸 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-37页 |
| 2.3.1 电转化感受态铜绿假单胞菌细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.3.2 线线重组 | 第33页 |
| 2.3.3 线环重组 | 第33-34页 |
| 2.3.4 PCR扩增体系 | 第34-35页 |
| 2.3.5 质粒小量提取步骤 | 第35页 |
| 2.3.6 酒精沉淀 | 第35-36页 |
| 2.3.7 鼠李糖脂提取方法 | 第36页 |
| 2.3.8 鼠李糖脂高产菌株的构建 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-41页 |
| 2.4.1 鼠李糖脂高产菌株的构建 | 第37-38页 |
| 2.4.2 鼠李糖脂产量测定 | 第38-39页 |
| 2.4.3 鼠李糖脂乳化实验 | 第39-40页 |
| 2.4.4 外源质粒稳定性检测 | 第40-41页 |
| 2.5 讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 盐霉素基因簇salBⅢ基因功能研究 | 第42-58页 |
| 3.1 引言 | 第42-43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-47页 |
| 3.2.1 主要试剂和仪器 | 第43页 |
| 3.2.2 培养基 | 第43-44页 |
| 3.2.3 菌株和质粒 | 第44-46页 |
| 3.2.4 抗生素和寡核苷酸 | 第46-47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-52页 |
| 3.3.1 BAC无痕修饰 | 第47-49页 |
| 3.3.2 Amp-ccdB PCR扩增体系 | 第49页 |
| 3.3.3 BAC酶切 | 第49页 |
| 3.3.4 诱导启动子插入 | 第49-50页 |
| 3.3.5 电转化感受态大肠杆菌细胞的制备 | 第50页 |
| 3.3.6 电转化感受态伯克氏菌细胞的制备 | 第50-51页 |
| 3.3.7 接合转移 | 第51页 |
| 3.3.8 受体菌发酵和化合物提取 | 第51-52页 |
| 3.3.9 HPLC-MS鉴定条件 | 第52页 |
| 3.4 实验结果 | 第52-57页 |
| 3.4.1 诱导启动子插入 | 第52页 |
| 3.4.2 BAC无痕修饰 | 第52-54页 |
| 3.4.3 盐霉素发酵 | 第54-57页 |
| 3.5 讨论 | 第57-58页 |
| 第四章 总结与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第65页 |
