| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 课题研究背景 | 第11-16页 |
| 1.1.1 红外光谱简介 | 第11页 |
| 1.1.2 红外光谱法检测酶活力 | 第11-13页 |
| 1.1.3 红外光谱在蛋白质结构动力学研究中的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.4 蛋白质研究常见红外探针 | 第14-16页 |
| 1.2 卤醇脱卤酶简介 | 第16-18页 |
| 1.2.1 卤醇脱卤酶催化的邻卤醇脱卤反应 | 第17页 |
| 1.2.2 卤醇脱卤酶催化的还氧化物开环反应 | 第17-18页 |
| 1.3 论文研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 卤醇脱卤酶HheC的诱导表达、纯化及酶活动力学FTIR检测方法 | 第20-37页 |
| 2.1 菌株及质粒 | 第20页 |
| 2.2 实验所用设备 | 第20-21页 |
| 2.3 实验试剂和配制方法 | 第21-23页 |
| 2.3.1 转化所需试剂 | 第21页 |
| 2.3.2 蛋白表达与纯化所需试剂 | 第21-22页 |
| 2.3.3 蛋白质电泳所需试剂 | 第22-23页 |
| 2.4 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.4.1 FTIR检测前样品制备 | 第23-26页 |
| 2.4.1.1 质粒pBAD-HheC转化 | 第23页 |
| 2.4.1.2 卤醇脱卤酶HheC的大量诱导表达 | 第23-24页 |
| 2.4.1.3 卤醇脱卤酶HheC离子交换层析 | 第24-25页 |
| 2.4.1.4 卤醇脱卤酶HheC的SDS-PAGE检测 | 第25-26页 |
| 2.4.1.5 Bradford法测蛋白浓度 | 第26页 |
| 2.4.2 FTIR检测酶活动力学 | 第26-27页 |
| 2.4.2.1 稳态动力学测定 | 第26-27页 |
| 2.4.2.2 静态FTIR测量 | 第27页 |
| 2.4.2.3 动态FTIR测量 | 第27页 |
| 2.4.3 气相分析验证 | 第27-28页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第28-35页 |
| 2.5.1 卤醇脱卤酶HheC样品制备 | 第28页 |
| 2.5.2 卤醇脱卤酶HheC酶活动力学研究 | 第28-34页 |
| 2.5.3 气相分析验证 | 第34-35页 |
| 2.6 本章小结 | 第35-37页 |
| 第三章 卤醇脱卤酶HheC特定位点插入红外探针-非天然氨基酸NAEK | 第37-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.2 实验仪器及设备 | 第38页 |
| 3.3 实验试剂及配制方法 | 第38页 |
| 3.4 实验步骤 | 第38-43页 |
| 3.4.1 质粒提取 | 第38-39页 |
| 3.4.2 His-Tag HheC质粒与pBAD-HheC琥珀突变体质粒构建 | 第39-41页 |
| 3.4.2.1 PCR扩增 | 第39-40页 |
| 3.4.2.2 PCR产物与质粒重新连接 | 第40-41页 |
| 3.4.3 双质粒转化 | 第41页 |
| 3.4.4 HheC突变体的诱导表达、纯化及SDS-PAGE检测 | 第41-42页 |
| 3.4.5 HheC中NAEK的红外检测 | 第42-43页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第43-48页 |
| 3.5.1 N_3~- 结合卤醇脱卤酶红外光谱检测 | 第43页 |
| 3.5.2 将NAEK引入卤醇脱卤酶HheC特定位点 | 第43-47页 |
| 3.5.2.1 卤醇脱卤酶含TAG突变体的构建 | 第44-46页 |
| 3.5.2.2 质粒转化及诱导表达 | 第46-47页 |
| 3.5.3 卤醇脱卤酶HheC中红外探针的检测 | 第47-48页 |
| 3.6 本章小结 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
