| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一部分 文献研究 | 第16-36页 |
| 1. 植物的表观遗传研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1 表观遗传学的兴起 | 第16页 |
| 1.2 表观遗传学的主要研究内容 | 第16-17页 |
| 2. 植物表观遗传学中的DNA甲基化 | 第17-26页 |
| 2.1 植物DNA甲基化机制 | 第17-19页 |
| 2.2 植物中的DNA甲基化 | 第19-20页 |
| 2.3 DNA甲基化在植物胁迫应答方面的作用 | 第20-21页 |
| 2.4 DNA甲基化在调控植物的生长发育方面的作用 | 第21-22页 |
| 2.5 DNA甲基化的检测方法 | 第22-26页 |
| 2.5.1 全基因组DNA甲基化检测方法 | 第23-24页 |
| 2.5.2 特定位点的DNA甲基化检测 | 第24-26页 |
| 2.5.3 新甲基化位点的寻找 | 第26页 |
| 3. DNA甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP) | 第26-28页 |
| 3.1 MSAP技术原理及方法 | 第27页 |
| 3.2 MSAP技术的应用 | 第27-28页 |
| 4. 道地药材川牛膝研究现状 | 第28-32页 |
| 4.1 川牛膝的分布和生境 | 第28-29页 |
| 4.2 川牛膝商品的主要产区 | 第29页 |
| 4.2.1 四川产区 | 第29页 |
| 4.2.2 重庆产区 | 第29页 |
| 4.2.3 湖南湖北产区 | 第29页 |
| 4.2.4 其他产区 | 第29页 |
| 4.3 川牛膝主要病虫害及防治 | 第29-31页 |
| 4.3.1 白锈病 | 第30页 |
| 4.3.2 根腐病 | 第30页 |
| 4.3.3 根线虫病 | 第30-31页 |
| 4.4 基于分子标记技术的川牛膝遗传多样性研究 | 第31页 |
| 4.5 川牛膝的化学成分及药理作用 | 第31-32页 |
| 4.5.1 植物甾酮类物质 | 第31-32页 |
| 4.5.2 多糖类物质 | 第32页 |
| 4.5.3 皂苷类 | 第32页 |
| 4.5.4 其他 | 第32页 |
| 5. 本课题的立题依据及研究意义 | 第32-36页 |
| 5.1 川牛膝研究面临的主要问题 | 第33页 |
| 5.2 立题依据及意义 | 第33-35页 |
| 5.3 本课题技术路线 | 第35-36页 |
| 第二部分 实验研究 | 第36-126页 |
| 1. 川牛膝MSAP体系的建立和优化 | 第37-59页 |
| 1.1 实验材料 | 第37-39页 |
| 1.1.1 样品 | 第37页 |
| 1.1.2 仪器及试剂 | 第37-39页 |
| 1.2 实验方法 | 第39-49页 |
| 1.2.1 川牛膝基因组DNA的提取 | 第39-41页 |
| 1.2.2 DNA纯度及浓度检测 | 第41页 |
| 1.2.3 双酶切实验优化 | 第41-43页 |
| 1.2.4 MSAP连接接头的配制及引物的稀释 | 第43-44页 |
| 1.2.5 连接 | 第44页 |
| 1.2.6 预扩增反应体系的优化 | 第44-45页 |
| 1.2.7 选择性扩增反应体系优化 | 第45-46页 |
| 1.2.8 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) | 第46-47页 |
| 1.2.9 银染 | 第47页 |
| 1.2.10 资料统计与分析 | 第47-48页 |
| 1.2.11 多态性条带的回收、纯化、测序及分析 | 第48页 |
| 1.2.12 引物筛选 | 第48-49页 |
| 1.3 实验结果与分析 | 第49-56页 |
| 1.3.1 川牛膝基因组DNA提取结果 | 第49-50页 |
| 1.3.2 双酶切实验优化结果 | 第50-54页 |
| 1.3.3 预扩增反应体系优化结果 | 第54页 |
| 1.3.4 选择性扩增反应体系优化结果 | 第54-55页 |
| 1.3.5 选择性扩增产物产生的条带类型 | 第55-56页 |
| 1.3.6 引物筛选 | 第56页 |
| 1.4 小结与讨论 | 第56-59页 |
| 1.4.1 小结 | 第56-57页 |
| 1.4.2 讨论 | 第57-59页 |
| 2. 川牛膝抗病差异性的遗传和表观遗传机制的研究 | 第59-79页 |
| 2.1 实验材料 | 第59-61页 |
| 2.1.1 样品 | 第59-61页 |
| 2.1.2 仪器及试剂 | 第61页 |
| 2.2 实验方法 | 第61-62页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第62-76页 |
| 2.3.1 白锈病侵染下不同产地川牛膝抗病能力的差异分析 | 第62-63页 |
| 2.3.2 基因组DNA提取结果 | 第63-64页 |
| 2.3.3 预扩增实验结果 | 第64页 |
| 2.3.4 选择性扩增实验结果 | 第64-66页 |
| 2.3.5 白锈病侵染下川牛膝MSAP扩增多态性分析 | 第66-76页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第76-79页 |
| 2.4.1 小结 | 第76-77页 |
| 2.4.2 讨论 | 第77-79页 |
| 3. 不同产地川牛膝遗传背景与表观遗传变异分析 | 第79-102页 |
| 3.1 实验材料 | 第79-83页 |
| 3.1.1 样品 | 第79-83页 |
| 3.1.2 仪器及试剂 | 第83页 |
| 3.2 实验方法 | 第83页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第83-97页 |
| 3.3.1 基因组DNA的提取结果 | 第83-84页 |
| 3.3.2 预扩增实验结果 | 第84页 |
| 3.3.3 选择性扩增实验结果 | 第84-87页 |
| 3.3.4 遗传背景与表观遗传变异分析 | 第87-97页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第97-102页 |
| 3.4.1 小结 | 第97-100页 |
| 3.4.2 讨论 | 第100-102页 |
| 4. 不同海拔川牛膝遗传背景与表观遗传变异分析 | 第102-110页 |
| 4.1 实验材料 | 第102页 |
| 4.1.1 样品 | 第102页 |
| 4.1.2 仪器及试剂 | 第102页 |
| 4.2 实验方法 | 第102-103页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第103-108页 |
| 4.3.1 基因组DNA的提取结果 | 第103页 |
| 4.3.2 预扩增实验结果 | 第103页 |
| 4.3.3 选择性扩增实验结果 | 第103-104页 |
| 4.3.4 遗传多样性与表观遗传多样性分析 | 第104-108页 |
| 4.3.5 差异条带比对分析 | 第108页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第108-110页 |
| 4.4.1 小结 | 第108-109页 |
| 4.4.2 讨论 | 第109-110页 |
| 5. 不同生长年限川牛膝表观遗传稳定性分析 | 第110-119页 |
| 5.1 实验材料 | 第110页 |
| 5.1.1 样品 | 第110页 |
| 5.1.2 仪器及试剂 | 第110页 |
| 5.2 实验方法 | 第110-111页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第111-117页 |
| 5.3.1 基因组DNA的提取结果 | 第111页 |
| 5.3.2 预扩增实验结果 | 第111页 |
| 5.3.3 选择性扩增实验结果 | 第111-112页 |
| 5.3.4 遗传多样性与表观遗传多样性分析 | 第112-117页 |
| 5.3.5 差异条带比对分析 | 第117页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第117-119页 |
| 5.4.1 小结 | 第117页 |
| 5.4.2 讨论 | 第117-119页 |
| 6. 讨论 | 第119-125页 |
| 6.1 药用植物川牛膝的甲基化式样及分布 | 第119-120页 |
| 6.1.1 不同的统计方法对DNA甲基化分析结果的影响 | 第119页 |
| 6.1.2 川牛膝甲基化样式及分布 | 第119-120页 |
| 6.2 环境对植物DNA甲基化的影响 | 第120-122页 |
| 6.2.1 生物胁迫对植物DNA甲基化的影响 | 第120-121页 |
| 6.2.2 非生物胁迫对DNA甲基化的影响 | 第121-122页 |
| 6.2.3 不同发育状态对DNA甲基化的影响 | 第122页 |
| 6.3 表观遗传研究道地性的两个切入点 | 第122-125页 |
| 6.3.1 药材生长的地域性特征 | 第122-123页 |
| 6.3.2 药材产生的特异性表型特征 | 第123-125页 |
| 7. 展望 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-137页 |
| 附录 | 第137-152页 |
| 1. 聚丙烯酰氨凝胶电泳图谱 | 第137-147页 |
| 2. 差异片段编号及序列 | 第147-149页 |
| 3. Blast2go注释图谱 | 第149-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 在读期间公开发表的学术论文及科研成果 | 第153-154页 |
