| 中文摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-37页 |
| 1.1 抗体亲和层析填料的研究进展 | 第15-23页 |
| 1.1.1 抗体药物发展前景 | 第15-16页 |
| 1.1.2 抗体亲和层析填料的来源 | 第16-18页 |
| 1.1.3 蛋白A各结构域与抗体结合的研究及结构改造方法 | 第18-23页 |
| 1.2 分子动力学模拟及表面等离子共振等技术对亲和配体进行改造的研究背景 | 第23-34页 |
| 1.2.1 分子动力学模拟的理论基础 | 第23-29页 |
| 1.2.2 表面等离子共振技术在分子相互作用研究中的应用 | 第29-32页 |
| 1.2.3 配体偶联技术的研究 | 第32-34页 |
| 1.3 讨论 | 第34-37页 |
| 第二章 蛋白A的D结构域的分子动力学计算 | 第37-47页 |
| 2.1 D结构域与IGM结合复合物晶体结构 | 第37-38页 |
| 2.2 计算方法 | 第38-41页 |
| 2.2.1 理论模型的建立 | 第38页 |
| 2.2.2 分子动力学模拟 | 第38-40页 |
| 2.2.3 MM-GBSA计算 | 第40-41页 |
| 2.3 计算结果 | 第41-44页 |
| 2.3.1 最小体系的建立 | 第41-42页 |
| 2.3.2 分解能分析 | 第42-44页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第44-47页 |
| 2.4.1 讨论 | 第44页 |
| 2.4.2 小结 | 第44-47页 |
| 第三章 Domain D、SpA domain D~(K46E)和SpA domain D~(K46E)四联体的构建表达 | 第47-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-50页 |
| 3.1.1 实验器材及设备 | 第47-48页 |
| 3.1.2 实验试剂及配制 | 第48-50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-60页 |
| 3.2.1 完成D结构域、K46E、K46E四联体的基因合成 | 第50-52页 |
| 3.2.2 入门载体的构建 | 第52-55页 |
| 3.2.3 表达载体的构建 | 第55-57页 |
| 3.2.4 D结构域、K46E和K46E四联体蛋白表达 | 第57-60页 |
| 3.3 实验结果 | 第60-67页 |
| 3.3.1 目的基因合成与入门载体的构建 | 第60页 |
| 3.3.2 表达载体构建与检测 | 第60-64页 |
| 3.3.3 D结构域、K46E、K46E四联体蛋白表达与鉴定 | 第64-67页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第67-69页 |
| 3.4.1 讨论 | 第67页 |
| 3.4.2 小结 | 第67-69页 |
| 第四章 D结构域、K46E和K46E四联体的中试发酵工艺及纯化工艺的研究 | 第69-83页 |
| 4.1 实验材料 | 第69-71页 |
| 4.1.1 实验器材及设备 | 第69-70页 |
| 4.1.2 实验试剂及配制 | 第70-71页 |
| 4.2 实验方法 | 第71-74页 |
| 4.2.1 发酵方法 | 第71-72页 |
| 4.2.2 D结构域、K46E以及K46E的四联体的纯化方法 | 第72-74页 |
| 4.3 实验结果 | 第74-81页 |
| 4.3.1 D结构域发酵、纯化电泳检测结果及纯化色谱图 | 第74-76页 |
| 4.3.2 K46E和K46E的四联体蛋白发酵、纯化电泳检测结果及纯化色谱图 | 第76-78页 |
| 4.3.3 纯化后的D结构域、K46E和K46E的四联体Western blot检测 | 第78-79页 |
| 4.3.4 S75分子筛柱纯化后的D结构域、K46E和K46E的四联体HPLC检测纯度 | 第79-81页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第81-83页 |
| 4.4.1 讨论 | 第81页 |
| 4.4.2 小结 | 第81-83页 |
| 第五章 SPR检验D结构域、K46E及其四联体与抗体IGG，IGM的相互作用 | 第83-91页 |
| 5.1 实验材料 | 第83-84页 |
| 5.1.1 实验器材及设备 | 第83页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第83-84页 |
| 5.2 实验方法 | 第84-86页 |
| 5.2.1 BCA检测D结构域、K46E和K46E四联体的蛋白浓度 | 第84-85页 |
| 5.2.2 SPR检测3种蛋白与抗体间的分子相互作用 | 第85-86页 |
| 5.3 实验结果 | 第86-88页 |
| 5.3.1 BCA标准曲线及检测结果 | 第86-87页 |
| 5.3.2 SPR检测结果 | 第87-88页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第88-91页 |
| 5.4.1 讨论 | 第88-89页 |
| 5.4.2 小结 | 第89-91页 |
| 第六章 D结构域，K46E及其四联体偶联填料纯化抗体IGG和IGM能力检验 | 第91-101页 |
| 6.1 实验材料 | 第91-93页 |
| 6.1.1 实验器材及设备 | 第91页 |
| 6.1.2 实验试剂及配制 | 第91-93页 |
| 6.2 实验方法 | 第93-94页 |
| 6.2.1 D结构域，K46E突变体和K46E四联体与预活化填料偶联 | 第93-94页 |
| 6.2.2 偶联填料与抗体结合能力检验 | 第94页 |
| 6.3 实验结果 | 第94-99页 |
| 6.3.1 偶联抗体亲和填料纯化IgG的结果 | 第94-97页 |
| 6.3.2 偶联抗体亲和填料纯化IgM的结果 | 第97-99页 |
| 6.4 讨论与小结 | 第99-101页 |
| 6.4.1 讨论 | 第99页 |
| 6.4.2 小结 | 第99-101页 |
| 第七章 结论 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-117页 |
| 在读期间取得的科研成果 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
