| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 1 绪论 | 第14-18页 |
| ·课题背景 | 第14页 |
| ·转录因子 | 第14页 |
| ·WRKY蛋白的研究进展 | 第14-17页 |
| ·WRKY蛋白的结构特征与分类 | 第15页 |
| ·WRKY转录因子的多样化功能 | 第15-17页 |
| ·WRKY在植物防御应答过程中的作用 | 第15页 |
| ·WRKY在植物发育及代谢中的作用 | 第15-16页 |
| ·WRKY在非生物胁迫中的作用 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 SmWRKY28基因的克隆及表达特性分析 | 第18-26页 |
| ·材料与方法 | 第18-22页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·植物材料 | 第18页 |
| ·菌株和载体 | 第18页 |
| ·实验试剂 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-22页 |
| ·蒙古柳总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·蒙古柳WRKY28基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·实时定量PCR分析SmWRKY28基因在不同组织器官的表达特性 | 第21页 |
| ·Northern blot分析SmWRKY28基因胁迫不同时间处理的表达特性 | 第21-22页 |
| ·结果与分析 | 第22-25页 |
| ·SmWRKY28基因的克隆及生物信息学分析 | 第22-24页 |
| ·SmWRKY28基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·SmWRKY28基因的生物信息学分析 | 第23-24页 |
| ·SmWRKY28基因的mRNA不同组组织器官的表达特性分析 | 第24页 |
| ·SmWRKY28基因不同时间胁迫下特异性表达分析 | 第24-25页 |
| ·本章小结 | 第25-26页 |
| 3 蒙古柳WRKY28蛋白的亚细胞定位 | 第26-29页 |
| ·材料与方法 | 第26-27页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·植物表达载体 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-27页 |
| ·SmWRKY28蛋白的亚细胞定位预测 | 第26页 |
| ·pBI121-SmWRKY28-GFP植物表达载体的构建 | 第26页 |
| ·基因枪法转化洋葱表皮及亚细胞定位 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-28页 |
| ·SmWRKY28蛋白亚细胞定位预测 | 第27页 |
| ·SmWRKY28-GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第27-28页 |
| ·本章小结 | 第28-29页 |
| 4 过表达SmWRKY28基因拟南芥的抗NaCl、NaHCO_3、Me-JA胁迫分析 | 第29-36页 |
| ·材料与方法 | 第29-31页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·植物材料、菌株和载体 | 第29页 |
| ·实验试剂和培养基 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-31页 |
| ·植物表达载体pCXSN-SmWRKY28的构建及酶切鉴定 | 第29页 |
| ·农杆菌介导法侵染拟南芥 | 第29-30页 |
| ·过表达SmWRKY28基因拟南芥的鉴定 | 第30页 |
| ·过表达SmWRKY28基因拟南芥的抗性分析 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·二元植物表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·过表达SmWRKY28基因拟南芥的鉴定 | 第32-33页 |
| ·过表达SmWRKY28基因拟南芥的抗盐性分析 | 第33-34页 |
| ·过表达SmWRKY28基因拟南芥的抗碱性盐分析 | 第34页 |
| ·过表达SmWRKY28基因拟南芥的抗Me-JA分析 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 5 农杆菌介导蒙古柳叶愈伤组织诱导及其遗传转化体系 | 第36-47页 |
| ·材料与方法 | 第36-42页 |
| ·材料 | 第36-40页 |
| ·植物材料、菌株和载体 | 第36页 |
| ·培养基和实验试剂的配制 | 第36-40页 |
| ·再生体系的建立 | 第40-41页 |
| ·蒙古柳愈伤组织诱导 | 第40-41页 |
| ·遗传转化体系的建立 | 第41-42页 |
| ·农杆菌介导的蒙古柳愈伤组织转化 | 第41页 |
| ·工作菌液侵染时间对转化效率的影响 | 第41页 |
| ·遗传转化株系的分子检测 | 第41-42页 |
| ·gus染色分析遗传转化过程中35S启动下β—半乳糖苷酶活性 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-46页 |
| ·蒙古柳再生体系的建立 | 第42-43页 |
| ·优化蒙古柳愈伤组织诱导培养基 | 第42页 |
| ·再生体系过程 | 第42-43页 |
| ·蒙古柳愈伤组织的遗传转化 | 第43-46页 |
| ·侵染时间对遗传转化的影响 | 第43页 |
| ·农杆菌介导35S-gus转化株系的PCR检测分析 | 第43-44页 |
| ·Southern blot检测转基因株系插入的拷贝数 | 第44-45页 |
| ·Northern blot分析T1代株系的gus基因的表达情况 | 第45页 |
| ·gus染色分析遗传转化过程中植株组织、器官的β-半乳糖苷酶活性 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 6 蒙古柳SmWRKY28蛋白的大肠杆菌原核表达 | 第47-52页 |
| ·材料与方法 | 第47-49页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·菌株和载体 | 第47页 |
| ·培养基及实验试剂的配置 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的构建 | 第48页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中表达 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-51页 |
| ·原核表达载体pGEX-6p-3-SmWRKY28的构建及鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白GST-SmWRKY28在大肠杆菌BL21中的表达及纯化 | 第50-51页 |
| ·诱导时间对GST-SmWRKY 28融合蛋白在大肠杆菌BL21表达的分析 | 第50页 |
| ·GST-SmWRKY 28融合蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 7 讨论 | 第52-54页 |
| ·SmWRKY 28的生物信息学及表达特性分析 | 第52页 |
| ·SmWRKY 28蛋白的亚细胞定位 | 第52-53页 |
| ·SmWRKY 28在逆境胁迫下的表型分析 | 第53页 |
| ·SmWRKY 28融合蛋白的诱导及纯化 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
