| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-21页 |
| ·概述 | 第12页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第12页 |
| ·纤维素酶的结构 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶在动物饲料中的应用 | 第14页 |
| ·纤维素酶在食品业中的应用 | 第14页 |
| ·纤维素酶在洗涤业中的应用 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶在造纸业中的应用 | 第15页 |
| ·纤维素酶在纺织业中的应用 | 第15页 |
| ·纤维素酶基因的克隆及表达研究 | 第15-17页 |
| ·细菌纤维素酶基因的研究 | 第15-16页 |
| ·真菌纤维素酶基因的研究 | 第16-17页 |
| ·包涵体的复性 | 第17-18页 |
| ·纤维素酶活的测定 | 第18-19页 |
| ·本课题研究内容和意义 | 第19-21页 |
| 第2章 草酸青霉纤维二糖水解酶基因cbhI的克隆 | 第21-41页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·主要培养基 | 第21-22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·菌种的活化培养 | 第24页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·基因扩增 | 第25-27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·转化 | 第27-28页 |
| ·快速提取质粒 | 第28页 |
| ·菌落PCR | 第28-29页 |
| ·重组菌序列的测定及保藏 | 第29页 |
| ·序列分析 | 第29-30页 |
| ·实验结果与分析 | 第30-39页 |
| ·基因组DNA检测结果及分析 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增结果及分析 | 第31页 |
| ·质粒提取结果及分析 | 第31-32页 |
| ·菌落PCR结果及分析 | 第32页 |
| ·序列测定结果及分析 | 第32-39页 |
| ·小结 | 第39-41页 |
| 第3章 草酸青霉纤维二糖水解酶基因cbh? 的原核表达 | 第41-58页 |
| ·实验材料 | 第41-44页 |
| ·菌株和质粒 | 第41页 |
| ·主要培养基 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42-44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-50页 |
| ·质粒的获取 | 第44-45页 |
| ·质粒pMD18-T-cbh?、pET-28a(+)双酶切 | 第45页 |
| ·X10-279 cbh? 片段与载体pET-28a(+)的连接 | 第45-46页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·转化 | 第46页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第46-47页 |
| ·阳性克隆测序及菌种保藏 | 第47页 |
| ·刚果红显色法测定重组菌酶活 | 第47页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第47-50页 |
| ·实验结果及分析 | 第50-56页 |
| ·质粒电泳检测及分析 | 第50页 |
| ·质粒双酶切电泳结果及分析 | 第50-51页 |
| ·质粒提取结果及分析 | 第51页 |
| ·菌落PCR电泳检测结果及分析 | 第51-52页 |
| ·重组菌序列的测定 | 第52页 |
| ·刚果红染色结果及分析 | 第52-53页 |
| ·蛋白电泳结果及分析 | 第53-56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 第4章 包涵体复性及活性测定 | 第58-70页 |
| ·实验材料 | 第58-60页 |
| ·菌株 | 第58页 |
| ·主要培养基 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-64页 |
| ·大量制备菌体 | 第60页 |
| ·蛋白的纯化 | 第60-61页 |
| ·蛋白标准曲线 | 第61页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第61-62页 |
| ·透析袋的处理 | 第62页 |
| ·蛋白的复性 | 第62页 |
| ·对硝基酚标准曲线 | 第62-63页 |
| ·重组CBH I活性的测定 | 第63页 |
| ·重组CBH I最适p H的测定 | 第63页 |
| ·重组CBH I最适温度的测定 | 第63页 |
| ·重组CBH I酶活性分析 | 第63-64页 |
| ·实验结果及分析 | 第64-69页 |
| ·包涵体的溶解 | 第64页 |
| ·包涵体的纯化 | 第64-65页 |
| ·蛋白标准曲线结果及分析 | 第65-66页 |
| ·对硝基酚标准曲线 | 第66-67页 |
| ·重组CBH I酶活性测定结果及分析 | 第67页 |
| ·重组CBH I最适p H测定结果及分析 | 第67页 |
| ·重组CBH I最适温度测定结果及分析 | 第67-68页 |
| ·层析结果及分析 | 第68-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第5章 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第77页 |
