| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 序言 | 第11-22页 |
| ·橡胶树产胶生理 | 第11-13页 |
| ·橡胶的生物合成 | 第11页 |
| ·橡胶树中的糖代谢 | 第11-13页 |
| ·植物中性/碱性转化酶的研究进展 | 第13-15页 |
| ·植物转化酶的分类 | 第13页 |
| ·中性/碱性转化酶的结构特征 | 第13页 |
| ·中性/碱性转化酶的生化特性 | 第13-14页 |
| ·中性/碱性转化酶的生理功能 | 第14页 |
| ·橡胶树中性/碱性转化酶的研究 | 第14-15页 |
| ·蛋白质相互作用筛选技术 | 第15-19页 |
| ·基于生物物理学手段的研究技术 | 第15-16页 |
| ·表面等离子共振技术 | 第15页 |
| ·双分子荧光互补技术 | 第15-16页 |
| ·活体细胞外研究技术 | 第16-17页 |
| ·亲和纯化-质谱技术 | 第16页 |
| ·GST Pull-Down技术 | 第16页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第16-17页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第17页 |
| ·蛋白质芯片技术 | 第17页 |
| ·双杂交技术 | 第17-19页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第17-19页 |
| ·SOS修复系统 | 第19页 |
| ·大肠杆菌双杂交系统 | 第19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| ·本研究的技术路线 | 第21-22页 |
| 2 巴西橡胶树均一化胶乳cDNA酵母文库的构建 | 第22-33页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·材料和方法 | 第22-28页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·质粒及菌种 | 第22页 |
| ·酶和生化试剂 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-28页 |
| ·橡胶树胶乳总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第24-25页 |
| ·LD-PCR扩增cDNA | 第25页 |
| ·过CHROMA SPIN~(TM) TE-400柱纯化ds cDNA | 第25-26页 |
| ·胶乳cDNA文库均一化处理 | 第26-27页 |
| ·均一化胶乳cDNA酵母文库构建 | 第27页 |
| ·酵母cDNA文库滴度检测 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-33页 |
| ·橡胶树胶乳总RNA的提取 | 第28页 |
| ·cDNA的合成与分析 | 第28-29页 |
| ·cDNA文库的纯化及均一化处理 | 第29页 |
| ·均一化胶乳cDNA酵母文库构建 | 第29-33页 |
| ·pGADT7-Rec载体的构建线性化处理 | 第29-31页 |
| ·cDNA酵母文库构建及文库质量检测 | 第31页 |
| ·cDNA酵母文库滴度检测 | 第31-33页 |
| 3 HbNIN2互作蛋白的初步筛选 | 第33-49页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-40页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·质粒及菌种 | 第33页 |
| ·酶与生化试剂 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-40页 |
| ·胶乳RNA的提取及质量检测 | 第33页 |
| ·第一链cDNA反转录合成 | 第33-34页 |
| ·诱饵载体pGBKT7-HbNIN2的构建 | 第34-36页 |
| ·HbNIN2片段扩增 | 第34-35页 |
| ·诱馆片段及载体的酶切与连接 | 第35-36页 |
| ·诱饵蛋白的自激活与毒性检测 | 第36页 |
| ·诱饵的自激活检测 | 第36页 |
| ·诱饵的毒性检测 | 第36页 |
| ·HbNIN2互作蛋白的文库筛选 | 第36-38页 |
| ·酵母菌落PCR分析及候选文库质粒分离 | 第38-39页 |
| ·候选文库质粒的富集 | 第39页 |
| ·序列比对分析 | 第39页 |
| ·候选阳性文库质粒回转酵母及点对点验证 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-49页 |
| ·RNA的提取 | 第40页 |
| ·诱饵载体构建 | 第40-41页 |
| ·HbNIN2片段扩增 | 第40页 |
| ·pGBKT7-HbNIN2载体构建 | 第40-41页 |
| ·诱饵pGBKT7-HbNIN2自激活和毒性检测 | 第41-42页 |
| ·诱饵自激活检测 | 第41页 |
| ·诱饵蛋白毒性检测 | 第41-42页 |
| ·HbNIN2互作蛋白筛选 | 第42-49页 |
| ·pGBKT7-HbNIN2对酵母文库的初步筛选 | 第42-43页 |
| ·候选阳性文库克隆的菌落PCR检测及测序分析 | 第43-45页 |
| ·候选阳性克隆的菌落PCR检测 | 第43-44页 |
| ·第一次测序结果分析 | 第44-45页 |
| ·候选阳性文库质粒分离与测序分析 | 第45-47页 |
| ·候选阳性文库质粒分离 | 第45-46页 |
| ·第二次测序分析 | 第46-47页 |
| ·候选阳性克隆功能预测 #37在线软件预测候选阳性克隆的蛋白功能结果如表6 | 第47页 |
| ·候选阳性质粒回转酵母与点对点验证 | 第47-49页 |
| 4 阳性互作子基因全长克隆与分析 | 第49-57页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-50页 |
| ·阳性互作蛋白的基因全长克隆 | 第49页 |
| ·生物信息学分析 | 第49页 |
| ·阳性Prey基因的原核表达载体构建 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-57页 |
| ·阳性互作蛋白基因全长序列分离与分析 | 第50页 |
| ·生物信息学分析 | 第50-56页 |
| ·原核表达分析 | 第56-57页 |
| 5 讨论与结论 | 第57-61页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录一：有关试剂的配制 | 第68-70页 |
| 附录二：缩略词 | 第70-71页 |
| 攻读硕士期间发表或者待发表的文章及参与科研项目 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |