| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| ·巴西橡胶树主要病害及危害 | 第11-12页 |
| ·植物先天免疫研究进展 | 第12-17页 |
| ·PTI途径 | 第13-16页 |
| ·ETI途径 | 第16-17页 |
| ·病程相关基因研究进展 | 第17-18页 |
| ·植物类受体激酶在植物抗病中的功能研究 | 第18-19页 |
| ·植物原生质体瞬时表达系统 | 第19-23页 |
| ·影响原生质体质量的因素 | 第19-21页 |
| ·原生质体遗传转化方法 | 第21-23页 |
| ·荧光素酶报告系统的研究进展 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 2 橡胶树叶肉原生质瞬时表达体系的建立 | 第26-34页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·橡胶树原生质体制备条件的优化 | 第26-27页 |
| ·原生质计数方法 | 第27页 |
| ·橡胶树原生质体活力检测 | 第27页 |
| ·橡胶树叶肉原生质体的转化 | 第27页 |
| ·橡胶树叶肉原生质体瞬时表达转化率的测定 | 第27-28页 |
| ·原生质体总蛋白的提取 | 第28页 |
| ·Western blot检测 | 第28页 |
| ·橡胶树原生质体瞬时表达过程的检测 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-34页 |
| ·不同酶解时间对橡胶原生质体数量的影响 | 第29-30页 |
| ·不同叶龄的叶片对橡胶原生质体数量的影响 | 第30-31页 |
| ·不同培养溶液对原生质体的影响 | 第31-32页 |
| ·橡胶树原生质体活力检测 | 第32页 |
| ·橡胶树叶肉原生质体转化效率分析 | 第32-33页 |
| ·外源基因转化橡胶树原生质体不同时间点的表达情况 | 第33-34页 |
| 3 巴西橡胶树FERONIA类受体激酶基因(HbFER)的克隆及生物信息学分析 | 第34-39页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·试验方法 | 第34-35页 |
| ·橡胶树不同组织总RNA的提取 | 第34页 |
| ·第一链cDNA的合成及同源片段的扩增 | 第34页 |
| ·5’RACE扩增获取基因全长 | 第34-35页 |
| ·生物信息学分析 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·橡胶树HbFER基因5'RACE的扩增及cDNA全长的克隆 | 第35-36页 |
| ·橡胶树HbFER与其它植物FER的同源性比较及保守结构域分析 | 第36-39页 |
| 4 橡胶树抗病反应相关基因对不同PAMPs的应答分析 | 第39-42页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·炭疽病菌细胞壁活性物质的提取 | 第39-40页 |
| ·样品处理及原生质体RNA提取 | 第40页 |
| ·候选基因的半定量表达分析 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-42页 |
| ·flg22对HbFER、HbPR1、HbPR5、HbMPK3、HbMPK6表达的影响 | 第40-41页 |
| ·chitin对HbFER、HbPR1、HbPR5、HbMPK3、HbMPK6表达的影响 | 第41页 |
| ·CWE对HbFER、HbPR1、HbPR5、HbMPK3、HbMPK6表达的影响 | 第41-42页 |
| 5 利用双荧光素酶报告系统分析橡胶树PTI反应 | 第42-51页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·橡胶树基因组DNA的提取 | 第42-43页 |
| ·相关基因启动子克隆 | 第43页 |
| ·启动子功能元件分析 | 第43页 |
| ·载体构建 | 第43页 |
| ·氯化铯密度梯度离心法大提质粒 | 第43-44页 |
| ·橡胶树叶肉原生质体转化 | 第44页 |
| ·双荧光素酶报告系统检测 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-51页 |
| ·各候选基因启动子扩增及原生质体瞬时表达重组载体构建 | 第45页 |
| ·HbFER、HbPR1、HbPR5启动子功能元件分析 | 第45-49页 |
| ·不同PAMPs对FER表达的影响 | 第49页 |
| ·不同PAMPs对PR1表达的影响 | 第49-50页 |
| ·不同PAMPs对PR5表达的影响 | 第50-51页 |
| 6 结论与讨论 | 第51-54页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 附录 | 第62-68页 |
| 附录一 原生质体制备过程中各种试剂 | 第62-63页 |
| 附录二 分离胶及浓缩胶的制备 | 第63-64页 |
| 附录三 反转录试剂盒操作步骤 | 第64页 |
| 附录四 附录真菌细胞壁提取方法步骤 | 第64-65页 |
| 附录五 TRIzol一步法提取植物总RNA方法 | 第65-66页 |
| 附录六 橡胶树基因组提取提取液与裂解液配方 | 第66页 |
| 附录七 论文中所用引物序列 | 第66-67页 |
| 附录八 本实验所用仪器及器材 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
