ADP葡萄糖焦磷酸化酶基因的玉米遗传转化与分子鉴定
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| ·高淀粉育种的必要性 | 第10页 |
| ·淀粉的合成机制 | 第10-11页 |
| ·淀粉合成的关键酶 | 第11-14页 |
| ·ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase) | 第11页 |
| ·AGPase的发现和命名 | 第11-12页 |
| ·AGPase的结构与功能 | 第12-13页 |
| ·AGPase酶活性调节 | 第13-14页 |
| ·玉米转基因的遗传转化研究进展 | 第14-20页 |
| ·基因枪法 | 第14-17页 |
| ·农杆菌介导法 | 第17-18页 |
| ·花粉管通道法 | 第18页 |
| ·PEG介导法 | 第18-19页 |
| ·子房注射法 | 第19页 |
| ·电穿孔法 | 第19页 |
| ·超声波介导法 | 第19-20页 |
| ·其他遗传转化方法 | 第20页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-42页 |
| ·材料 | 第22-28页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22-23页 |
| ·试验所用试剂 | 第23-25页 |
| ·试验所用主要仪器 | 第25-26页 |
| ·试验所用培养基 | 第26-28页 |
| ·AGPase基因原核表达方法 | 第28-34页 |
| ·单克隆的挑取及菌液保存 | 第28页 |
| ·小量提取质粒DNA | 第28-29页 |
| ·质粒DNA的Bam HⅠ/NotⅠ的双酶切 | 第29页 |
| ·酶切产物的回收 | 第29-30页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第30页 |
| ·BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·重组质粒转化至BL21感受态细胞 | 第31页 |
| ·菌落PCR鉴定转化效果 | 第31-32页 |
| ·诱导蛋白的表达 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达 | 第33-34页 |
| ·转基因植株获得方法 | 第34-42页 |
| ·小量提取质粒DNA | 第34页 |
| ·剥幼胚及诱导玉米幼胚愈伤组织 | 第34页 |
| ·洗涤金粉 | 第34-35页 |
| ·包裹质粒DNA | 第35页 |
| ·基因枪轰击愈伤组织 | 第35-36页 |
| ·抗性愈伤的筛选培养 | 第36-37页 |
| ·转基因植株的再生 | 第37页 |
| ·抗性愈伤的免疫试纸条检测 | 第37页 |
| ·抗性愈伤的总DNA的提取 | 第37-39页 |
| ·抗性愈伤的PCR检测 | 第39-40页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-58页 |
| ·Sh2和BTTP-Sh2基因在大肠杆菌中的表达 | 第42-45页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·菌落PCR检测结果 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·基因枪介导法转基因植株的获得 | 第45-47页 |
| ·玉米幼胚的获取过程 | 第45-46页 |
| ·转基因植株的获得 | 第46-47页 |
| ·抗性愈伤的试纸条检测 | 第47-51页 |
| ·抗性愈伤的PCR检测 | 第51-58页 |
| ·转Sh2基因的抗性愈伤的PCR检测 | 第51-54页 |
| ·转BTTP-Sh2基因的抗性愈伤的PCR检测 | 第54-58页 |
| 4 讨论与结论 | 第58-62页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| ·基因枪介导法遗传转化条件的优化 | 第58页 |
| ·基因枪转化玉米转基因植株获得 | 第58-59页 |
| ·后续研究工作 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 攻读硕士学位期间已发表的论文 | 第70-71页 |
