| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 主要符号说明 | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-34页 |
| ·土壤污染现状 | 第13-18页 |
| ·土壤重金属污染现状及其危害 | 第16-17页 |
| ·土壤有机物污染现状及其危害 | 第17-18页 |
| ·土壤污染的修复技术 | 第18-23页 |
| ·重金属污染土壤的修复技术 | 第19-21页 |
| ·有机物污染土壤的修复技术 | 第21-22页 |
| ·转基因植物修复被污染的土壤的研究进展 | 第22-23页 |
| ·转基因苜蓿的研究进展 | 第23-25页 |
| ·转抗寒及抗旱基因苜蓿 | 第23-24页 |
| ·转耐盐碱基因苜蓿 | 第24页 |
| ·转抗病虫害基因苜蓿 | 第24页 |
| ·转抗除草剂基因苜蓿 | 第24-25页 |
| ·转修复土壤污染基因苜蓿 | 第25页 |
| ·转基因植物疫苗 | 第25页 |
| ·构建转基因植物的常用手段 | 第25-30页 |
| ·农杆菌介导法 | 第25-27页 |
| ·直接导入法 | 第27-30页 |
| ·紫花苜蓿的基因工程技术研究 | 第30-31页 |
| ·课题的研究目的与意义 | 第31-34页 |
| ·紫花苜蓿的简介及治污可能 | 第31-32页 |
| ·本课题的目的意义 | 第32-34页 |
| 第二章 含有 MT10 和 NSFA 双质粒农杆菌的转化 | 第34-53页 |
| ·实验材料 | 第34-38页 |
| ·菌种及质粒 | 第34页 |
| ·仪器及设备 | 第34-35页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第35-37页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·主要溶液的配制 | 第36-37页 |
| ·主要培养基成分和配制方法 | 第37页 |
| ·酶及引物 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-46页 |
| ·MT10 基因和 NSFA 基因植物表达载体的构建 | 第38-45页 |
| ·载体质粒的保存 | 第38-41页 |
| ·克隆载体 pMD18-T- MT、pMD18-T - NSFA 的构建、转化及筛选 | 第41-43页 |
| ·植物双元表达载体 MT、pBI121- NSFA 的构建 | 第43-45页 |
| ·含有 MT 和 NSFA 双质粒农杆菌的转化 | 第45-46页 |
| ·含有 MT 质粒农杆菌的转化 | 第45-46页 |
| ·含有 MT 和 NSFA 双质粒农杆菌的转化 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-50页 |
| ·MT 基因和 NSFA 基因植物表达载体的构建 | 第46-49页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第46页 |
| ·PCR 扩增 | 第46-47页 |
| ·PCR 产物与 T 载体连接，用蓝白斑筛选重组子 | 第47页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-MT 与 pMD18-T- NSFA 的鉴定 | 第47-48页 |
| ·质粒 DNA 测序鉴定 | 第48页 |
| ·植物双元表达载体 pBI121- MT、pBI121- NSFA 的构建及鉴定 | 第48-49页 |
| ·含有 MT 和 NSFA 双质粒农杆菌的转化 | 第49-50页 |
| ·含 MT 质粒农杆菌的 PCR 鉴定 | 第49-50页 |
| ·含 MT 和 NSFA 双质粒农杆菌的 PCR 鉴定 | 第50页 |
| ·分析与讨论 | 第50-53页 |
| 第三章 含 MT 和 NSFA 基因紫花苜蓿高效遗传体系的建立 | 第53-74页 |
| ·实验材料 | 第53-56页 |
| ·外植体材料 | 第53页 |
| ·仪器及设备 | 第53-54页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第54-56页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·主要溶液的配制 | 第54-56页 |
| ·实验方法 | 第56-61页 |
| ·无菌苗的培养 | 第56-57页 |
| ·乙醇浸泡时间对种子萌发率和污染率影响 | 第56页 |
| ·不同灭菌剂浓度对种子萌发率和污染率影响 | 第56-57页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第57-58页 |
| ·不同激素水平对愈伤诱导的影响 | 第57页 |
| ·抗褐化剂对愈伤组织的影响 | 第57-58页 |
| ·外植体对 Km 的耐受力试验 | 第58页 |
| ·农杆菌介导的 MT 和 NSFA 双基因共转化紫花苜蓿 | 第58-60页 |
| ·预培养时间对共转化效率的影响 | 第58页 |
| ·农杆菌菌液浓度对转化效率的影响 | 第58页 |
| ·浸染时间对转化效率的影响 | 第58-59页 |
| ·共培养时间对转化效率的影响 | 第59页 |
| ·菌液浓度，浸染时间，共培养时间对转化效率影响的正交试验设计 | 第59-60页 |
| ·愈伤组织的脱菌筛选培养 | 第60页 |
| ·脱菌剂的选择 | 第60页 |
| ·头孢克肟最佳抑菌浓度试验 | 第60页 |
| ·愈伤组织的生芽诱导 | 第60-61页 |
| ·蔗糖浓度对诱导生芽的影响 | 第60页 |
| ·不同激素水平对诱导生芽的影响 | 第60页 |
| ·酸水解酪蛋白浓度对诱导生芽的影响 | 第60页 |
| ·琼脂浓度对诱导生芽的影响 | 第60-61页 |
| ·无根苗的生根诱导 | 第61页 |
| ·不同激素水平对诱导生根的影响 | 第61页 |
| ·琼脂浓度对诱导生根的影响 | 第61页 |
| ·抗性植株的移植栽培 | 第61页 |
| ·实验结果与讨论 | 第61-72页 |
| ·无菌苗的培养 | 第61-63页 |
| ·乙醇浸泡时间对对种子萌发率和染菌效果影响 | 第61页 |
| ·不同灭菌剂水平对种子萌发率和染菌效果影响 | 第61-63页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第63-66页 |
| ·不同品种、不同外植体类型对苜蓿愈伤组织诱导的影响 | 第63页 |
| ·激素水平对愈伤诱导的影响 | 第63-65页 |
| ·抗褐化剂对愈伤组织的影响 | 第65-66页 |
| ·农杆菌介导的 MT 和 NSFA 共转化紫花苜蓿 | 第66-67页 |
| ·预培养时间对共转化效率的影响 | 第66页 |
| ·菌液浓度对共转化效率的影响 | 第66页 |
| ·浸染时间对愈伤组织的影响 | 第66页 |
| ·共培养时间对愈伤组织的影响 | 第66页 |
| ·菌液浓度，浸染时间，共培养时间正交试验对转化效率影响 | 第66-67页 |
| ·愈伤组织的脱菌筛选培养 | 第67-68页 |
| ·头孢克肟最佳抑菌浓度试验 | 第67-68页 |
| ·Km 选择压的选择 | 第68页 |
| ·生芽诱导 | 第68-70页 |
| ·蔗糖浓度对诱导生芽的影响 | 第68-69页 |
| ·激素水平对诱导生芽的影响 | 第69-70页 |
| ·酸水解酪蛋白浓度对诱导生芽的影响 | 第70页 |
| ·琼脂浓度对诱导生芽的影响 | 第70页 |
| ·生根诱导 | 第70-71页 |
| ·不同激素水平对诱导生根的影响 | 第70-71页 |
| ·琼脂浓度对诱导生根的影响 | 第71页 |
| ·抗性植株的移植栽培 | 第71-72页 |
| ·讨论与分析 | 第72-74页 |
| 第四章 转基因植株的分子检测及功能鉴定 | 第74-90页 |
| ·实验材料 | 第74-75页 |
| ·仪器及设备 | 第74页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第74-75页 |
| ·引物（上海博尚生物合成） | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-79页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第75-78页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第75-77页 |
| ·转基因植株的 RT-PCR 检测 | 第77-78页 |
| ·植物的生长与耐受实验 | 第78-79页 |
| ·紫花苜蓿对重金属和有机物的耐受实验 | 第78-79页 |
| ·成熟植株对重金属和有机物的耐受实验 | 第79页 |
| ·实验结果 | 第79-89页 |
| ·转基因紫花苜蓿基因组 DNA 的提取 | 第79-80页 |
| ·PCR 检测转基因紫花苜蓿 | 第80-81页 |
| ·转基因紫花苜蓿总 RNA 的提取 | 第81-82页 |
| ·转基因紫花苜蓿的 RT-PCR 检测 | 第82-83页 |
| ·幼苗对重金属和有机物的耐受实验 | 第83-86页 |
| ·幼苗对重金属的耐受实验 | 第83-84页 |
| ·幼苗对有机物的耐受实验 | 第84-85页 |
| ·幼苗对重金属和有机物的耐受实验 | 第85-86页 |
| ·成熟植株对重金属和有机物的耐受实验 | 第86-89页 |
| ·成熟植株对重金属的耐受实验 | 第86-87页 |
| ·成熟植株对有机物的耐受实验 | 第87-88页 |
| ·成熟植株对重金属和有机物的耐受实验 | 第88-89页 |
| ·分析与讨论 | 第89-90页 |
| 全文结论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第98-99页 |
