| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-22页 |
| 1 CTL的过继细胞治疗 | 第16-19页 |
| ·CTL的分群 | 第16页 |
| ·活化 CTL的特异性抗原 | 第16-17页 |
| ·CTL特异性抗肿瘤的机制 | 第17-18页 |
| ·CTL的体外培养 | 第18页 |
| ·CTL的临床应用及提高疗效的途径 | 第18-19页 |
| 2 抗肿瘤免疫中的PD-1 抑制信号 | 第19-21页 |
| ·PD-1 和PD-L1 分子的表达 | 第19页 |
| ·PD-1 抑制T细胞活性的机制 | 第19-21页 |
| 3 本课题研究方案及目的 | 第21-22页 |
| ·研究方案 | 第21页 |
| ·本课题的研究目的 | 第21-22页 |
| 第二章 重组腺病毒载体Ad35-anti-PD-1 的构建、鉴定、扩增及滴度测定 | 第22-51页 |
| 1 前言 | 第22-23页 |
| 2 实验器材 | 第23-27页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·实验试剂 | 第23-24页 |
| ·实验所需引物 | 第24-25页 |
| ·实验试剂的配置 | 第25-27页 |
| 3 实验方法 | 第27-42页 |
| ·pCB218-anti-PD-1 的构建 | 第27-35页 |
| ·Ad35-anti-PD-1 的重组、扩增和纯化 | 第35-42页 |
| 4 实验结果 | 第42-49页 |
| ·pCB218-anti-PD-1 的构建结果 | 第42-47页 |
| ·重组腺病毒Ad35-anti-PD-1 鉴定 | 第47-49页 |
| ·重组腺病毒Ad-anti-PD-1 的滴度测定 | 第49页 |
| 5 讨论 | 第49-50页 |
| 6 总结 | 第50-51页 |
| 第三章 PD-1 抗体的表达、检测和纯化 | 第51-63页 |
| 1 前言 | 第51页 |
| 2 实验器材 | 第51-55页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·实验仪器 | 第51-52页 |
| ·实验试剂 | 第52-53页 |
| ·主要试剂配置方法 | 第53-55页 |
| 3 实验方法 | 第55-58页 |
| ·Ad35-anti-PD-1 感染 293 细胞 | 第55页 |
| ·Elisa检测PD-1 抗体的表达量 | 第55-56页 |
| ·Western blotting检测PD-1 抗体重链和轻链的分子量 | 第56-57页 |
| ·PD-1 抗体的Protein G纯化 | 第57-58页 |
| ·考马斯亮蓝检测纯化的PD-1 抗体的纯度 | 第58页 |
| ·ELISA检测纯化的PD-1 抗体的浓度 | 第58页 |
| 4 实验结果 | 第58-61页 |
| ·293 细胞上清中PD-1 抗体的表达量 | 第58-60页 |
| ·PD-1 抗体重链和轻链的鉴定 | 第60-61页 |
| ·纯化后的PD-1 抗体纯度检测 | 第61页 |
| ·纯化的PD-1 抗体的浓度 | 第61页 |
| 5 讨论 | 第61-62页 |
| 6 小结 | 第62-63页 |
| 第四章 PD-1 信号被阻断的CTL对肿瘤细胞的杀伤 | 第63-74页 |
| 1 前言 | 第63页 |
| 2 实验器材 | 第63-65页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·实验器材 | 第63-64页 |
| ·实验试剂 | 第64页 |
| ·实验试剂的配置 | 第64-65页 |
| 3 实验方法 | 第65-68页 |
| ·外周血单个核细胞的分离 | 第65页 |
| ·提呈TP53 抗原的成熟DC的培养 | 第65-66页 |
| ·尼龙毛柱法分离T淋巴细胞 | 第66页 |
| ·Westernblotting检测成熟DC中TP53 的表达 | 第66页 |
| ·流式细胞术检测成熟DC的表型 | 第66-67页 |
| ·混合淋巴细胞反应 | 第67页 |
| ·ELISPOT检测p53 特异性的CTL IFN-γ的分泌 | 第67-68页 |
| ·PD-1 信号阻断的TP 53 特异性的CTL对肿瘤细胞的体外杀伤 | 第68页 |
| 4 实验结果 | 第68-73页 |
| ·成熟DC的形态鉴定 | 第68-69页 |
| ·成熟DC的表型 | 第69-70页 |
| ·成熟DC中TP53 表达的检测 | 第70页 |
| ·TP53 特异性的CTL IFN-γ分泌的检测 | 第70-71页 |
| ·PD-1 信号阻断的 TP53 特异性的CTL对肿瘤细胞的体外杀伤 | 第71-73页 |
| 5 讨论 | 第73页 |
| 6 小结 | 第73-74页 |
| 第五章 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附录 | 第82页 |
