| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-23页 |
| 第一章 醛缩酶与丙酮酸激酶的概述 | 第13-23页 |
| 1 醛缩酶 | 第13-15页 |
| ·醛缩酶概述 | 第13-14页 |
| ·醛缩酶的特性和功能 | 第14-15页 |
| 2 丙酮酸激酶 | 第15-19页 |
| ·丙酮酸激酶概述 | 第15-16页 |
| ·丙酮酸激酶的同工酶 | 第16页 |
| ·丙酮酸激酶的结构 | 第16-17页 |
| ·丙酮酸激酶的特性和功能 | 第17-19页 |
| ·鸡毒支原体中的丙酮酸激酶 | 第19页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第19-23页 |
| ·醛缩酶和丙酮酸激酶作为鸡毒支原体糖酵解酶的研究意义 | 第19-20页 |
| ·醛缩酶和丙酮酸激酶作为膜蛋白的研究意义 | 第20-23页 |
| 第二篇 醛缩酶的生物学功能研究 | 第23-47页 |
| 第二章 醛缩酶的原核表达及酶活性测定 | 第23-31页 |
| 摘要 | 第23页 |
| 1 材料与方法 | 第23-25页 |
| ·菌种与载体 | 第23页 |
| ·主要生化试剂 | 第23-24页 |
| ·鸡毒支原体基因组的提取 | 第24页 |
| ·目的基因的Overlap PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·重组表达载体的构建及融合蛋白的诱导表达 | 第25页 |
| ·rMGfba的酶活性检测 | 第25页 |
| 2 结果 | 第25-28页 |
| ·目的基因的Overlap PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·重组表达载体pET28a-fba的构建 | 第26-27页 |
| ·rMGfba的诱导表达及纯化 | 第27-28页 |
| ·rMGfba酶活性检测 | 第28页 |
| 3 讨论 | 第28-31页 |
| 第三章 醛缩酶多克隆抗体的制备及其在鸡毒支原体的定位 | 第31-35页 |
| 摘要 | 第31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-32页 |
| ·材料与试剂 | 第31页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第31页 |
| ·鸡毒支原体膜蛋白的提取 | 第31页 |
| ·Western-blot试验 | 第31-32页 |
| ·免疫胶体金透射电镜检测 | 第32页 |
| 2 结果 | 第32-33页 |
| ·鸡毒支原体膜蛋白的提取 | 第32-33页 |
| ·Western-blot检则 | 第33页 |
| ·透射电镜检测 | 第33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 鸡毒支原体醛缩酶黏附特性研究 | 第35-47页 |
| 摘要 | 第35页 |
| 1 材料与方法 | 第35-38页 |
| ·菌株、细胞与载体 | 第35页 |
| ·荧光表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·重组菌的诱导表达及膜蛋白的提取 | 第36-37页 |
| ·重组菌膜蛋白的定位鉴定 | 第37页 |
| ·E.coli-fba-gfp感染DF-1细胞试验 | 第37页 |
| ·黏附阻断试验 | 第37-38页 |
| 2 结果 | 第38-43页 |
| ·荧光表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·rMGfba-gfp的诱导表达 | 第39-41页 |
| ·rMGfba-gfp在大肠杆菌中的定位 | 第41页 |
| ·FBA介导大肠杆菌黏附DF-1细胞 | 第41-43页 |
| ·FBA抗体对MG黏附的影响 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-47页 |
| 第三篇 丙酮酸激酶的生物学功能研究 | 第47-69页 |
| 第五章 丙酮酸激酶的原核表达及酶活性测定 | 第47-53页 |
| 摘要 | 第47页 |
| 1 材料与方法 | 第47-49页 |
| ·菌种与载体 | 第47页 |
| ·主要生化试剂 | 第47-48页 |
| ·目的基因的Overlap PCR扩增 | 第48页 |
| ·重组表达载体的构建及融合蛋白的诱导表达 | 第48页 |
| ·rMGpykF的酶活性检测 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-51页 |
| ·目的基因的Overlap PCR扩增 | 第49页 |
| ·重组表达载体pET28a-pykF的构建 | 第49-50页 |
| ·rMGpykF的诱导表达及纯化 | 第50-51页 |
| ·rMGpykF酶活性检测 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第六章 丙酮酸激酶多克隆抗体的制备及其在鸡毒支原体的定位 | 第53-57页 |
| 摘要 | 第53页 |
| 1 材料与方法 | 第53-54页 |
| ·材料与试剂 | 第53页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第53页 |
| ·Western-blot试验 | 第53-54页 |
| ·免疫胶体金透射电镜检测 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-55页 |
| ·Western-blot检测 | 第54-55页 |
| ·透射电镜检测 | 第55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 第七章 鸡毒支原体丙酮酸激酶的生物学活性研究 | 第57-69页 |
| 摘要 | 第57页 |
| 1 材料与方法 | 第57-62页 |
| ·菌株、细胞与载体 | 第57页 |
| ·pykF免疫原性检测 | 第57-58页 |
| ·补体结合试验 | 第58-59页 |
| ·荧光表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·重组菌的诱导表达及膜蛋白的提取 | 第60页 |
| ·重组菌膜蛋白的定位鉴定 | 第60页 |
| ·E.coli-pykF-gfp感染DF-1细胞试验 | 第60-61页 |
| ·黏附阻断试验 | 第61-62页 |
| 2 结果 | 第62-66页 |
| ·pykF免疫原性检测 | 第62页 |
| ·pykF免疫保护力检测 | 第62页 |
| ·荧光表达载体的构建 | 第62-64页 |
| ·rMGpykF-gfp的诱导表达 | 第64页 |
| ·rMGpykF-gfp在大肠杆菌中的定位 | 第64-65页 |
| ·pykF介导大肠杆菌黏附DF-1细胞 | 第65-66页 |
| ·pykF抗体对MG黏附的影响 | 第66页 |
| 3 讨论 | 第66-69页 |
| 全文总结 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第81页 |
