| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 主要符号对照表 | 第10-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-29页 |
| ·细胞因子 | 第11-12页 |
| ·白细胞介素-1（IL-1）家族 | 第12页 |
| ·IL-1 家族蛋白的发现 | 第12-13页 |
| ·IL-1 家族蛋白的成熟机制 | 第13-14页 |
| ·IL-1 家族蛋白的受体 | 第14-17页 |
| ·IL-1 家族蛋白结构的研究现状 | 第17-19页 |
| ·IL-1 家族蛋白与疾病 | 第19-21页 |
| ·IL-1 家族中的特殊成员－IL-33 | 第21-26页 |
| ·IL-33 的结构生物学研究现状 | 第26页 |
| ·本文的研究目的、技术路线与研究意义 | 第26-29页 |
| 第2章 材料与方法 | 第29-61页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·实验材料 | 第29-37页 |
| ·相关基因的获取 | 第29页 |
| ·克隆与表达载体 | 第29-31页 |
| ·菌种与细胞株 | 第31-32页 |
| ·细胞系 | 第32页 |
| ·克隆构建 | 第32-33页 |
| ·试剂 | 第33-34页 |
| ·耗材与仪器 | 第34-35页 |
| ·常用缓冲溶液及培养基 | 第35-37页 |
| ·实验方法 | 第37-61页 |
| ·表达载体的构建 | 第37-40页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第37-38页 |
| ·目的片段的回收、酶切与连接 | 第38页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·连接产物或质粒的转化 | 第39页 |
| ·阳性克隆和重组子的筛选 | 第39页 |
| ·突变体的构建 | 第39-40页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第40-46页 |
| ·大肠杆菌对重组蛋白的小量表达与检测 | 第40页 |
| ·大肠杆菌表达重组蛋白的大量提取 | 第40页 |
| ·大肠杆菌表达硒代重组蛋白的大量提取 | 第40-41页 |
| ·昆虫细胞的培养 | 第41页 |
| ·转染昆虫细胞获得表达目的蛋白的病毒 | 第41-42页 |
| ·昆虫细胞表达目的蛋白的小量检测 | 第42页 |
| ·昆虫细胞表达目的蛋白的大量提取 | 第42-43页 |
| ·亲和柱层析纯化 | 第43-44页 |
| ·离子交换柱层析纯化 | 第44页 |
| ·分子筛层析纯化 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的去糖基化处理 | 第45-46页 |
| ·蛋白质的结晶 | 第46-48页 |
| ·蛋白质结晶的原理 | 第46-48页 |
| ·晶体的初筛 | 第48页 |
| ·晶体的优化 | 第48页 |
| ·蛋白质晶体的 X 射线衍射 | 第48-53页 |
| ·晶体 X 射线衍射的原理 | 第48-50页 |
| ·衍射数据的收集 | 第50-51页 |
| ·数据的处理与结构的解析 | 第51-53页 |
| ·结构的修正 | 第53页 |
| ·常用的蛋白晶体学软件 | 第53页 |
| ·蛋白质溶液状态下的 X 射线小角度散射 | 第53-56页 |
| ·X 射线小角度散射原理 | 第53-54页 |
| ·散射数据的收集 | 第54-55页 |
| ·数据的处理及模型的建立 | 第55-56页 |
| ·常用的工具软件 | 第56页 |
| ·表面等离子共振（SPR） | 第56-58页 |
| ·SPR 的原理 | 第56页 |
| ·SPR 检测蛋白质-蛋白质之间相互作用 | 第56-58页 |
| ·荧光素酶报告基因实验（Luciferase assay） | 第58-61页 |
| 第3章 重组蛋白的表达纯化与制备 | 第61-74页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·蛋白的基本信息 | 第61-62页 |
| ·IL-33 蛋白的表达与纯化 | 第62-65页 |
| ·野生型 IL-33 的表达与纯化 | 第62-65页 |
| ·IL-33 突变体的表达与纯化 | 第65页 |
| ·受体 ST2 与 IL-1RAcP 胞外域的表达与纯化 | 第65-68页 |
| ·野生型受体的纯化 | 第65-66页 |
| ·二元复合体与三元复合体的体外重组与纯化 | 第66-68页 |
| ·蛋白的去糖基化处理 | 第68-73页 |
| ·糖基化位点突变蛋白的表达 | 第68-69页 |
| ·糖苷酶处理蛋白 | 第69-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第4章 IL-33 与 ST2 二元复合体 X 射线晶体学研究 | 第74-88页 |
| ·引言 | 第74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-87页 |
| ·结晶条件的筛选 | 第74-80页 |
| ·结构的解析 | 第80-87页 |
| ·数据的准备 | 第80页 |
| ·分子置换法求解相位 | 第80页 |
| ·反常散射法求解相位 | 第80-84页 |
| ·模型搭建 | 第84-85页 |
| ·结构的修正 | 第85-87页 |
| ·小结 | 第87-88页 |
| 第5章 IL-33 与受体 ST2 二元复合体的结构分析 | 第88-94页 |
| ·引言 | 第88页 |
| ·结果与讨论 | 第88-93页 |
| ·小结 | 第93-94页 |
| 第6章 IL-33 与受体复合物的 X 射线小角度散射（SAXS）的研究 | 第94-104页 |
| ·引言 | 第94页 |
| ·结果与讨论 | 第94-103页 |
| ·数据处理 | 第94-96页 |
| ·模型的建立和检验 | 第96-103页 |
| ·小结 | 第103-104页 |
| 第7章 IL-33 与受体相互作用的生化分析 | 第104-110页 |
| ·引言 | 第104页 |
| ·结果与讨论 | 第104-109页 |
| ·SPR 检测 IL-33 及其突变体与 ST2 的结合 | 第104-106页 |
| ·SPR 检测 IL-33 区域突变体对三元复合体形成的影响 | 第106-108页 |
| ·荧光素酶报告基因实验研究 IL-33 突变对激活 NF-κB 的影响 | 第108-109页 |
| ·小结 | 第109-110页 |
| 第8章 博士期间其它研究工作 | 第110-123页 |
| ·细胞内的氧化还原调节 | 第110-111页 |
| ·AtGrxS16 蛋白 | 第111页 |
| ·AtGrxS16 N 端结构域具有 GIY-YIG 核酸酶的分子结构特点 | 第111-112页 |
| ·AtGrxS16 N 端结构域酶活中心与 GIY-YIG 核酸酶的比对 | 第112-115页 |
| ·在酵母中 AtGrxS16 N 端结构域抑制 C 端的 Grx 活性 | 第115页 |
| ·AtGrx S16 蛋白具有高聚体，二聚体和单体的形式 | 第115-116页 |
| ·AtGrx S16 蛋白二聚体形式含有 Fe-S 中心 | 第116-117页 |
| ·AtGrxS16 N 端结构域的核酸酶活性测定 | 第117页 |
| ·AtGrxS16 N 端结构域突变体的核酸酶活性测定 | 第117-118页 |
| ·不同的二价阳离子对于重组 AtGrxS16 N 端结构域核酸酶活性的影响 | 第118-119页 |
| ·AtGrxS16 N 端结构域对 cpDNA 的核酸酶活性测定 | 第119-120页 |
| ·AtGrxS16 全长蛋白中形成链内二硫键 | 第120-121页 |
| ·AtGrxS16 蛋白中的链内二硫键同时调节 N 端以及 C 端的活性 | 第121页 |
| ·AtGrxS16 在叶绿体中行使功能的模型 | 第121-123页 |
| 第9章 总结与展望 | 第123-128页 |
| ·工作总结 | 第123-126页 |
| ·工作展望 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-134页 |
| 致谢 | 第134-136页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第136页 |
