| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 冰核细菌概述 | 第12-18页 |
| ·冰核蛋白结构 | 第12-15页 |
| ·冰核蛋白成冰核机制 | 第15页 |
| ·其他组分对冰核活性影响 | 第15-16页 |
| ·冰核蛋白糖脂复合物组装 | 第16-17页 |
| ·冰核细菌的应用 | 第17-18页 |
| 2 杆状病毒表达系统 | 第18-24页 |
| ·杆状病毒基本结构 | 第18-19页 |
| ·杆状病毒的生活史 | 第19-21页 |
| ·杆状病毒基因的表达 | 第21页 |
| ·Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第21-24页 |
| 第二章 一般材料与方法 | 第24-29页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·菌种和载体 | 第24页 |
| ·昆虫和病毒 | 第24页 |
| ·工具酶 | 第24页 |
| ·抗生素和试剂盒 | 第24页 |
| ·其他试剂 | 第24-25页 |
| ·常用培养基和缓冲液 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-29页 |
| ·细菌DNA提取 | 第25-26页 |
| ·质粒DNA提取 | 第26-27页 |
| ·感受态制备 | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶切胶回收DNA目的片段 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE胶配制 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第28-29页 |
| 第三章 冰核细菌Erwinia ananas 110冰核基因iceA的原核表达及冰核活性分析 | 第29-36页 |
| 1 材料与方法 | 第29-32页 |
| ·冰核细菌基因组提取 | 第29页 |
| ·冰核基因iceA的PCR扩增 | 第29页 |
| ·重组克隆载体pMD19-T-ice构建 | 第29-30页 |
| ·重组表达载体pET-23a(+)-ice构建 | 第30-31页 |
| ·pET-23a(+)-ice、pET-23a(+)转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS | 第31页 |
| ·蛋白表达和SDS-PAGE分析 | 第31页 |
| ·冰核活性测定 | 第31-32页 |
| 2. 结果与分析 | 第32-35页 |
| ·冰核基因iceA基因扩增和重组克隆载体pMD19-T-ice鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组克隆载体pET-23a(+)-ice鉴定 | 第33页 |
| ·蛋白表达与SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| ·表达蛋白冰核活性分析 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 含冰核基因iceA重组杆状病毒AcV/polh-ice构建 | 第36-46页 |
| 1 材料与方法 | 第36-41页 |
| ·polyhedrin基因合成 | 第36页 |
| ·iceA基因扩增 | 第36页 |
| ·重组转移质粒pFASTBac~(TM)Dual-polh构建 | 第36-38页 |
| ·重组转移质粒pFASTBac~(TM)Dual-polh-ice构建 | 第38-39页 |
| ·重组穿梭载体Bacmid构建 | 第39-40页 |
| ·Bacmid/polh-ice转染sf9细胞 | 第40-41页 |
| ·病毒株扩增 | 第41页 |
| ·表达蛋白检测 | 第41页 |
| ·AcV/polh-ice对甜菜夜蛾影响 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-45页 |
| ·重组转移质粒pFASTBac~(TM)Dual-polh的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组转移质粒pFASTBac~(TM)Dual-polh-ice的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组穿梭载体Bacmid/polh-ice鉴定 | 第43页 |
| ·感染sf9细胞与收获病毒株 | 第43-44页 |
| ·表达蛋白分析 | 第44-45页 |
| ·甜菜夜蛾感染 | 第45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 总结与展望 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录A：Erwinia ananas 110冰核蛋白序列 | 第53-54页 |
| 附录B：polh基因合成序列 | 第54-55页 |
| 附录C：氨基酸符号 | 第55-56页 |
| 附录D：缩略语 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
