| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-21页 |
| ·硫胺素焦磷酸依赖酶概述 | 第9-10页 |
| ·乙酰乳酸合酶的概述 | 第10-11页 |
| ·E.coil AHAS Ⅰ独特的催化和调节性能 | 第11-13页 |
| ·动力学特性 | 第11-12页 |
| ·对缬氨酸抑制的敏感性 | 第12-13页 |
| ·乙酰乳酸合酶的晶体结构 | 第13-17页 |
| ·催化活性中心整体结构 | 第13-15页 |
| ·活性部位 | 第15页 |
| ·辅因子结合位点 | 第15-17页 |
| ·催化作用机制的研究 | 第17-20页 |
| ·催化反应的具体过程 | 第17-18页 |
| ·反应的中间步骤 | 第18-20页 |
| ·乙酰乳酸合酶的活性研究方法 | 第20-21页 |
| 第二章 乙酰乳酸合酶基因表达质粒pProEX HTb-AHAS的构建 | 第21-31页 |
| ·材料与仪器 | 第21-23页 |
| ·菌株和载体 | 第21页 |
| ·工具酶和试剂 | 第21-22页 |
| ·主要溶液配方 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·方法及过程 | 第23-28页 |
| ·引物设计和合成 | 第23页 |
| ·ilvB基因的PCR扩增 | 第23-25页 |
| ·pPROEX HTb质粒DNA的小量制备 | 第25页 |
| ·双酶切回收后的目的基因和载体质粒DNA | 第25页 |
| ·重组质粒pPROEX HTb-AHAS的制备 | 第25-26页 |
| ·E.coil BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的提取及双酶切鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒测序 | 第27页 |
| ·含重组质粒的菌种保存 | 第27-28页 |
| ·实验结果 | 第28-30页 |
| ·PCR扩增ilvB目的基因结果 | 第28页 |
| ·pPROEX HTb质粒提取 | 第28-29页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定结果 | 第29页 |
| ·pPROEX HTb-AHAS的测序结果 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 第三章 乙酰乳酸合酶的诱导表达 | 第31-39页 |
| ·材料与仪器 | 第31-33页 |
| ·实验菌株 | 第31页 |
| ·所需试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·主要溶液配方 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·重组酶AHAS的小量诱导表达 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE初步检测诱导表达结果 | 第33-34页 |
| ·超声破碎处理菌体沉淀 | 第34页 |
| ·Bradford法测定融合蛋白浓度 | 第34-35页 |
| ·重组酶AHAS的亲和层析纯化 | 第35页 |
| ·实验结果 | 第35-37页 |
| ·重组蛋白AHAS的诱导表达结果 | 第35-36页 |
| ·重组酶AHAS的亲和层析纯化结果 | 第36页 |
| ·Bradford法测定融合蛋白浓度结果 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第四章 乙酰乳酸合酶活性研究 | 第39-53页 |
| ·材料与仪器 | 第39-40页 |
| ·所需试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·主要溶液配方 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·乙偶姻标准曲线 | 第40页 |
| ·粗酶和纯化后酶活性检测 | 第40-41页 |
| ·反应条件优化 | 第41-42页 |
| ·酶稳定性分析 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-51页 |
| ·乙偶姻质量标准曲线 | 第43-44页 |
| ·粗酶和纯化酶的分析结果 | 第44-45页 |
| ·反应条件优化结果 | 第45-48页 |
| ·酶稳定性分析结果 | 第48-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 总结与展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59页 |