| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| ·低温酶的研究进展 | 第12-15页 |
| ·低温酶的简介 | 第12页 |
| ·低温酶的催化特性及其低温机制 | 第12-13页 |
| ·低温酶的结构特征 | 第13-15页 |
| ·低温蛋白酶的研究进展 | 第15-17页 |
| ·蛋白酶的分类 | 第15-16页 |
| ·低温蛋白酶的来源与种类 | 第16-17页 |
| ·低温蛋白酶基因的克隆 | 第17-20页 |
| ·基因克隆技术 | 第17页 |
| ·通过分子手段获得蛋白酶基因的主要方法 | 第17-19页 |
| ·国内外蛋白酶基因克隆的研究进展 | 第19-20页 |
| ·课题研究的目的、意义及研究内容 | 第20-22页 |
| ·课题研究的目的、意义 | 第20页 |
| ·课题研究内容及实验思路 | 第20-22页 |
| 第2章 利用假单胞菌属所产低温蛋白酶的保守区序列进行基因克隆 | 第22-42页 |
| ·试验材料 | 第22-23页 |
| ·试验菌株 | 第22-23页 |
| ·试验用药品及试剂 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·仪器和设备 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-30页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·耐冷菌 Pseudomonas sp.W7 总 DNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·PCR 扩增条件 | 第25-27页 |
| ·目的条带回收 | 第27页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第27-28页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌 DH5 感受态细胞 | 第28页 |
| ·质粒 DNA 的转化 | 第28-29页 |
| ·质粒的提取 | 第29页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第29页 |
| ·测序及序列分析 | 第29-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-40页 |
| ·基因组 DNA 的制备 | 第30页 |
| ·PCR 克隆低温蛋白酶 5’端基因序列 | 第30-32页 |
| ·PCR 克隆蛋白酶基因的 3’端基因序列 | 第32-34页 |
| ·耐冷菌 Pseudomonas sp.W7 蛋白酶的基因克隆 | 第34-35页 |
| ·生物信息学分析 | 第35-40页 |
| ·本章小结 | 第40-42页 |
| 第3章 耐冷菌 Pseudomonas sp.W7 所产低温蛋白酶的酶谱分析 | 第42-49页 |
| ·试验材料 | 第42-43页 |
| ·试验菌株 | 第42页 |
| ·试验用药品及试剂 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·仪器和设备 | 第42-43页 |
| ·试验方法 | 第43-45页 |
| ·耐冷菌 Pseudomonas sp.W7 产酶条件 | 第43页 |
| ·耐冷菌 Pseudomonas sp.W7 所产低温蛋白酶酶谱分析 | 第43-44页 |
| ·蛋白条带的胶内酶解 | 第44页 |
| ·质谱分析 | 第44-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-47页 |
| ·不同温度下 Pseudomonas sp.W7 所产低温蛋白酶酶谱分析 | 第45-46页 |
| ·低温蛋白酶质谱分析 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 第4章 质谱分析耐冷菌 Pseudomonas sp.W7 低温蛋白酶及其基因克隆 | 第49-65页 |
| ·试验材料 | 第49-50页 |
| ·试验菌株 | 第49页 |
| ·试验用药品及试剂 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| ·仪器和设备 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-52页 |
| ·引物设计 | 第50-51页 |
| ·PCR 扩增程序 | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-62页 |
| ·PCR 克隆低温蛋白酶 5’端基因序列 | 第52-53页 |
| ·PCR 克隆低温蛋白酶基因的 3’端基因序列 | 第53-55页 |
| ·PCR 克隆低温蛋白酶基因序列 | 第55-57页 |
| ·生物信息学分析 | 第57-62页 |
| ·序列比对 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-67页 |
| 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
