| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略语 | 第6-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-22页 |
| 第一章 抗冻蛋白的类型和抗冻作用机制 | 第9-22页 |
| 1. 抗冻蛋白的发现 | 第9页 |
| 2. 抗冻蛋白的分类及其特征 | 第9-14页 |
| ·鱼类抗冻蛋白 | 第10-12页 |
| ·昆虫抗冻蛋白 | 第12-13页 |
| ·植物抗冻蛋白 | 第13-14页 |
| 3. 抗冻蛋白的作用机制 | 第14-15页 |
| ·吸附抑制学说 | 第14页 |
| ·晶格匹配模型 | 第14-15页 |
| 4. 抗冻蛋白的实际应用 | 第15-16页 |
| 5. 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 参考文献 | 第17-22页 |
| 第二部分 实验内容 | 第22-56页 |
| 第一章 小胸鳖甲抗冻蛋白 MpAFP698 的原核表达和鉴定 | 第22-33页 |
| 1 材料和方法 | 第22页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·方法 | 第22页 |
| ·菌液活化 | 第22-27页 |
| ·质粒 pET30a-Mpafp698 的小量提取与鉴定 | 第23-24页 |
| ·质粒 pET30a-Mpafp698 对大肠杆菌 BL21 的转化 | 第24页 |
| ·质粒 pET30a-Mpafp698 阳性克隆的鉴定 | 第24-25页 |
| ·原核表达抗冻蛋白的纯化和检测 | 第25-26页 |
| ·抗冻蛋白 Mpafp698 的原核诱导表达 | 第25页 |
| ·表达产物 Mpafp698 的 SDS-PAGE 检测 | 第25-26页 |
| ·原核表达抗冻蛋白 MpAFP698 的渗透压和 THA 的测定 | 第26-27页 |
| 2 结果 | 第27-30页 |
| ·原核表达质粒 pET30a-Mpafp698 的鉴定 | 第27-28页 |
| ·原核表达抗冻蛋白 MpAFP698 的纯化和检测 | 第28-30页 |
| ·原核表达抗冻蛋白 MpAFP698 的渗透压和 THA 的测定 | 第30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 第二章 外源添加 MpAFP698 抗冻蛋白对大肠杆菌的冷冻保护 | 第33-40页 |
| 前言 | 第33页 |
| 1 材料与方法 | 第33-34页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌样品制备方法 | 第33页 |
| ·MpAFP698 抗冻蛋白保护样品制备 | 第33-34页 |
| ·低温处理大肠杆菌存活率测定 | 第34页 |
| 2 结果 | 第34-38页 |
| ·MpAFP698 不同浓度对大肠杆菌低温存活率的测定 | 第34-35页 |
| ·MpAFP698 作用不同时间对大肠杆菌菌低温存活率的测定 | 第35-38页 |
| 3 讨论 | 第38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 第三章 外源添加 MpAFP698 抗冻蛋白对红细胞的冷冻保护 | 第40-49页 |
| 1 材料和方法 | 第40-41页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-41页 |
| ·红细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·抗冻蛋白对低温保存红细胞的保护 | 第41页 |
| ·电导率测定 | 第41页 |
| ·溶血率测定 | 第41页 |
| ·乳酸脱氢酶（LDH）数值测定 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-46页 |
| ·AFP 效果监测，4℃，72h 。AFP、BSA 浓度为 0.04mM | 第41-43页 |
| ·AFP 浓度效果监测，4℃，72h | 第43-44页 |
| ·AFP 时间效果监测，4℃，AFP 浓度 0.06mM | 第44-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-49页 |
| 第四章 免疫胶体金技术鉴定抗冻蛋白在细胞的作用位点 | 第49-56页 |
| 1 材料和方法 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·免疫胶体金检测方法 | 第49-50页 |
| ·超薄切片的制备（大肠细菌） | 第49-50页 |
| ·免疫胶体金标记及染色 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-52页 |
| ·免疫胶体金观察大肠杆菌的金标颗粒 | 第50-51页 |
| ·免疫胶体金观察外加小胸鳖甲 MpAFP698 的大肠杆菌金标颗粒分布 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第56-57页 |
| 第四部分 附录 | 第57页 |
| 附录 1 常用试剂配制方法 | 第57-60页 |
| 附录 2 常用仪器设备 | 第60-61页 |
| 个人简历 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
