| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 常见英文缩写词 | 第17-19页 |
| 引言 | 第19-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-45页 |
| 第一节 肌形成过程及其调控 | 第21-25页 |
| 1. 骨骼肌起源 | 第21页 |
| 2. 出生后骨骼肌的生长发育 | 第21-22页 |
| 3. 成年动物体骨骼肌的维持 | 第22页 |
| 4. 肌肉萎缩 | 第22页 |
| 5. 骨骼肌形成过程的调控 | 第22-25页 |
| ·肌细胞的分化 | 第22-23页 |
| ·肌肉调控因子(MRFs)对肌形成过程的调控 | 第23-24页 |
| ·生长因子对肌形成过程的调控 | 第24-25页 |
| 第二节 IGF-1对肌形成过程的影响及其调控 | 第25-32页 |
| 1. IGF-1在骨骼肌中的生物学功能 | 第25-26页 |
| 2. IGF-1对肌肉特异转录因子(MRFs)的调控 | 第26页 |
| 3. IGF-1对肌肉萎缩的抑制作用 | 第26页 |
| 4. IGF-1在骨骼肌细胞的信号通路 | 第26-27页 |
| 5. 对IGF-1活性的调控 | 第27-32页 |
| ·IGF-1结合蛋白(IGFBP) | 第27-28页 |
| ·GH/IGF-1轴 | 第28-29页 |
| ·生长抑素对GH/IGF-1轴的调控 | 第29页 |
| ·生长抑素受体及信号通路 | 第29-30页 |
| ·生长抑素拮抗剂及其免疫中和研究进展 | 第30-32页 |
| ·生长抑素拮抗剂-半胱胺 | 第30-31页 |
| ·免疫中和生长抑素 | 第31-32页 |
| 第三节 肌抑素对肌形成过程的影响 | 第32-37页 |
| 1. 简介 | 第32页 |
| 2. 组织表达分布 | 第32页 |
| 3. 肌抑素的生物合成途径 | 第32-33页 |
| 4. 生物学功能 | 第33-34页 |
| ·对成肌细胞细胞周期的调控 | 第33页 |
| ·对成肌细胞分化的调控 | 第33页 |
| ·对骨骼肌蛋白合成和分解代谢的调控 | 第33-34页 |
| 5. 对肌抑素活性的调控 | 第34-35页 |
| ·前体肽对肌抑素活性的调控 | 第34页 |
| ·卵泡抑制素对肌抑素活性的调控 | 第34-35页 |
| ·其他调控蛋白 | 第35页 |
| 6. 肌抑素的信号转导通路 | 第35-36页 |
| ·Smad通路 | 第35页 |
| ·非Smad通路 | 第35-36页 |
| 7. 肌抑素拮抗研究进展 | 第36-37页 |
| 第四节 免疫中和技术及其载体 | 第37-45页 |
| 1. 免疫中和技术 | 第37页 |
| 2. 免疫佐剂及抗原投递载体 | 第37-44页 |
| ·CTB-霍乱毒素B亚基 | 第37-38页 |
| ·CTA1-DD | 第38-41页 |
| ·沙门氏菌鞭毛蛋白Flagellin | 第41-43页 |
| ·细胞因子免疫调节剂-干扰素γ和GM-CSF | 第43-44页 |
| 3. 被动免疫与工程化抗体 | 第44-45页 |
| 第二章 肌抑素在小鼠淋巴细胞中的表达及其对巨噬细胞和树突状细胞的影响 | 第45-80页 |
| 摘要 | 第45-46页 |
| 第一节 小鼠肌抑素的组织器官表达分布 | 第46-55页 |
| 1. 实验材料 | 第46-47页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46-47页 |
| ·主要器材 | 第47页 |
| ·溶液配制 | 第47页 |
| 2. 实验方法 | 第47-50页 |
| ·高脂日粮饲喂C57BL/6小鼠 | 第47页 |
| ·脾脏淋巴细胞的分离、培养 | 第47-48页 |
| ·LPS处理 | 第48页 |
| ·RNA提取 | 第48页 |
| ·反转录 | 第48-49页 |
| ·荧光定量PCR | 第49-50页 |
| ·统计分析 | 第50页 |
| 3. 结果与分析 | 第50-53页 |
| ·高脂日粮饲喂对小鼠体重及各组织器官重量的影响 | 第50-51页 |
| ·高脂日粮饲喂对小鼠肌抑素、F4/80及CD68在不同组织器官中表达的影响 | 第51-52页 |
| ·LPS处理对小鼠脾脏淋巴细胞肌抑素及卵泡抑制素表达的影响 | 第52-53页 |
| 4. 讨论 | 第53-55页 |
| 第二节 肌抑素对小鼠骨髓来源巨噬细胞的影响 | 第55-68页 |
| 1. 实验材料 | 第55页 |
| ·实验动物、主要器材及溶液配制 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| 2. 实验方法 | 第55-57页 |
| ·小鼠骨髓单核细胞的制备及诱导巨噬细胞的分化培养 | 第55页 |
| ·实验处理 | 第55页 |
| ·RNA提取、反转录及荧光定量PCR | 第55-56页 |
| ·ELISA检测 | 第56-57页 |
| ·统计分析 | 第57页 |
| 3. 结果与分析 | 第57-66页 |
| ·肌抑素对巨噬细胞细胞因子基因表达的影响 | 第57-63页 |
| ·肌抑素对巨噬细胞TNF-α表达的影响 | 第57-59页 |
| ·肌抑素对巨噬细胞IL-1 β基因表达的影响 | 第59-60页 |
| ·肌抑素对巨噬细胞IL-6基因表达的影响 | 第60-61页 |
| ·肌抑素对巨噬细胞IL-10基因表达的影响 | 第61-62页 |
| ·肌抑素对巨噬细胞IFN γ基因表达的影响 | 第62-63页 |
| ·肌抑素对巨噬细胞分类标志基因(iNOS)表达的影响 | 第63-64页 |
| ·巨噬细胞肌抑素受体基因(ActRⅡA、ActRⅡB)表达规律 | 第64-66页 |
| ·LPS处理对巨噬细胞肌抑素受体基因ActRⅡB表达的影响 | 第64-65页 |
| ·肌抑素处理对巨噬细胞肌抑素受体ActRⅡB表达的影响 | 第65页 |
| ·LPS处理对巨噬细胞肌抑素受体基因ActRⅡA表达的影响 | 第65-66页 |
| ·肌抑素处理对巨噬细胞肌抑素受体ActRⅡA表达的影响 | 第66页 |
| 4. 讨论 | 第66-68页 |
| 第三节 肌抑素对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的影响及信号通路研究 | 第68-76页 |
| 1. 实验材料 | 第68页 |
| ·细胞 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·溶液配制 | 第68页 |
| 2. 实验方法 | 第68-69页 |
| ·小鼠巨噬细胞系RAW263.7细胞的培养 | 第68页 |
| ·实验处理 | 第68-69页 |
| ·RNA提取、反转录及荧光定量PCR | 第69页 |
| ·统计分析 | 第69页 |
| 3. 结果与分析 | 第69-76页 |
| ·肌抑素对RAW264.7(TNF-α、IL-1 β、IFNγ、iNOS、COX2)基因表达的影响 | 第69-72页 |
| ·肌抑素对RAW264.7 TNF-α表达的影响 | 第69-70页 |
| ·肌抑素对RAW264.7 IL-1β表达的影响 | 第70-71页 |
| ·肌抑素对RAW264.7 IFNγ表达的影响 | 第71页 |
| ·肌抑素对RAW264.7 iNOS表达的影响 | 第71-72页 |
| ·肌抑素对RAW264.7 COX2表达的影响 | 第72页 |
| ·肌抑素受体对RAW264.7细胞因子表达的影响 | 第72-73页 |
| ·肌抑素对RAW264.7细胞信号通路的影响 | 第73-76页 |
| 4. 讨论 | 第76页 |
| 第四节 肌抑素对小鼠骨髓来源树突状细胞及其因子表达的影响 | 第76-78页 |
| 1. 实验材料 | 第76页 |
| ·实验动物、主要器材及溶液配制 | 第76页 |
| ·试剂 | 第76页 |
| 2. 实验方法 | 第76-77页 |
| ·小鼠骨髓单核细胞的制备及树突状细胞的诱导分化培养 | 第76-77页 |
| ·实验处理 | 第77页 |
| ·提取RNA、反转录 | 第77页 |
| ·荧光定量PCR | 第77页 |
| ·统计分析 | 第77页 |
| 3. 肌抑素对树突状细胞TNF-α、IL6及IL10基因表达的影响结果及讨论 | 第77-78页 |
| 本章小结 | 第78-80页 |
| 第三章 免疫中和生长抑素 | 第80-106页 |
| 摘要 | 第80-82页 |
| 第一节 小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子/生长抑素融合蛋白的构建、表达及其对小鼠生长的影响 | 第82-98页 |
| 1. 实验材料 | 第82-84页 |
| ·实验动物 | 第82页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第82页 |
| ·宿主菌和载体 | 第82页 |
| ·酶、其他试剂和试剂盒 | 第82页 |
| ·主要化学试剂的配制 | 第82-84页 |
| ·本节所用引物 | 第84页 |
| ·合成多肽 | 第84页 |
| 2. 实验方法 | 第84-92页 |
| ·小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因的克隆 | 第84-86页 |
| ·小鼠脾脏细胞的分离、培养 | 第84页 |
| ·脾脏细胞的PHA刺激 | 第84页 |
| ·提取总RNA | 第84-85页 |
| ·反转录 | 第85页 |
| ·PCR扩增小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因 | 第85页 |
| ·基因的纯化、TA克隆 | 第85页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第85-86页 |
| ·热激转化、涂板、鉴定阳性克隆、测序 | 第86页 |
| ·小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子/生长抑素融合基因及其表达载体的构建 | 第86-87页 |
| ·SOE PCR融合基因的构建 | 第86页 |
| ·表达载体构建 | 第86-87页 |
| ·表达与纯化 | 第87-90页 |
| ·诱导表达 | 第87页 |
| ·亲和纯化 | 第87-88页 |
| ·蛋白的透析复性 | 第88-89页 |
| ·SDS-PAGE和Western Blot | 第89-90页 |
| ·免疫小鼠 | 第90-91页 |
| ·ELISA检测小鼠血清生长抑素抗体水平 | 第91页 |
| ·ELISA检测小鼠血清生长激素水平 | 第91页 |
| ·荧光定量PCR检测小鼠肝脏和肌肉IGF-1、myostatin表达水平 | 第91页 |
| ·小鼠血清生化指标测定 | 第91-92页 |
| ·统计分析 | 第92页 |
| 3. 结果与分析 | 第92-97页 |
| ·GM-CSF基因的克隆及融合基因表达载体构建 | 第92页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第92-93页 |
| ·对小鼠体重的影响 | 第93-94页 |
| ·对小鼠血清特异抗生长抑素抗体的影响 | 第94页 |
| ·对小鼠血清生长激素的影响 | 第94-95页 |
| ·对小鼠血清生化指标的影响 | 第95-96页 |
| ·对小鼠肝脏、肌肉IGF-1和myostatin基因表达的影响 | 第96-97页 |
| 4. 讨论 | 第97-98页 |
| 第二节 霍乱毒素B亚基/生长抑素融合基因的构建、表达及对小鼠生长的影响 | 第98-106页 |
| 1. 实验材料 | 第98页 |
| 2. 实验方法 | 第98-100页 |
| ·融合基因及重组表达载体的构建 | 第98页 |
| ·融合蛋白的表达、纯化 | 第98-99页 |
| ·纯化后蛋白的五聚体化 | 第99页 |
| ·SDS-PAGE和Western Blot检测 | 第99页 |
| ·融合蛋白的生物活性检测 | 第99页 |
| ·免疫小鼠 | 第99页 |
| ·血清抗体水平检测 | 第99-100页 |
| ·血清生长激素水平、生化指标检测 | 第100页 |
| ·统计分析 | 第100页 |
| 3. 结果与分析 | 第100-105页 |
| ·CTB/SS融合基因及重组表达载体的构建 | 第100页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化及五聚体化 | 第100-102页 |
| ·重组CTB/SS生物活性检测 | 第102页 |
| ·重组蛋白对小鼠体重的影响 | 第102-103页 |
| ·血清抗体水平 | 第103-104页 |
| ·血清生长激素水平、生化指标检测 | 第104-105页 |
| 4. 讨论 | 第105-106页 |
| 第四章 抗肌抑素单链抗体的合成、表达及其对成肌细胞和肌纤维的影响 | 第106-125页 |
| 摘要 | 第106-107页 |
| 1. 实验材料 | 第107-108页 |
| ·引物 | 第107-108页 |
| ·细胞 | 第108页 |
| ·质粒 | 第108页 |
| ·试剂 | 第108页 |
| ·溶液配制 | 第108页 |
| 2. 实验方法 | 第108-113页 |
| ·抗肌抑素单链抗体的拼接与密码子优化 | 第108-109页 |
| ·单链抗体的全基因合成 | 第109页 |
| ·表达载体的构建及蛋白表达 | 第109-110页 |
| ·亲和层析 | 第110页 |
| ·SDS-PAGE和Western Blot检测 | 第110页 |
| ·ELISA检测纯化后蛋白与抗原的结合能力 | 第110-111页 |
| ·单链抗体对成肌细胞增殖的影响 | 第111-112页 |
| ·单链抗体对成肌细胞增殖的影响-MTT法检测 | 第111页 |
| ·Q-PCR检测p21基因表达 | 第111-112页 |
| ·单链抗体对H_2O_2诱导的肌细胞肌肉萎缩标志基因表达的影响 | 第112页 |
| ·单链抗体对肌抑素信号通路的影响 | 第112页 |
| ·统计分析 | 第112-113页 |
| 3. 结果与分析 | 第113-123页 |
| ·单链抗体基因序列的优化 | 第113-115页 |
| ·序列的合成、表达载体的构建 | 第115-116页 |
| ·蛋白的表达纯化 | 第116-117页 |
| ·单链抗体与抗原的亲和力检测 | 第117-118页 |
| ·对细胞增殖的影响 | 第118-120页 |
| ·肌肉萎缩标志E3泛素连接酶MAFbx和MuRF1基因表达的影响 | 第120-122页 |
| ·单链抗体对肌抑素Smad信号通路的影响 | 第122-123页 |
| 4. 讨论 | 第123-125页 |
| 第五章 论文创新点及后续研究展望 | 第125-126页 |
| 1.创新点 | 第125页 |
| 2.后续研究展望 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-138页 |
| 攻读博士学位期间发表与录用的论文 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
