| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 论文创新点 | 第14-15页 |
| 研究意义 | 第15-16页 |
| 技术路线 | 第16-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-46页 |
| 第一章 猪圆环病毒2型研究进展 | 第17-35页 |
| 1. PCV病毒的发现与分类 | 第17-18页 |
| 2. 基因组结构及其编码蛋白 | 第18-25页 |
| ·基因组结构 | 第18-19页 |
| ·Rep蛋白 | 第19-21页 |
| ·Cap蛋白 | 第21-22页 |
| ·ORF3蛋白 | 第22-23页 |
| ·与复制相关的基因间区域 | 第23-25页 |
| 3. PCV复制 | 第25页 |
| 4. PCV转录 | 第25-26页 |
| 5. 病毒内吞 | 第26-28页 |
| 6. PCV2编码蛋白与宿主的相互作用 | 第28-30页 |
| ·Rep蛋白与宿主蛋白的互作研究 | 第28页 |
| ·Cap蛋白与宿主蛋白的互作研究 | 第28-30页 |
| ·ORF3编码蛋白与宿主蛋白的互作研究 | 第30页 |
| 7. PCV2对免疫系统的影响 | 第30-35页 |
| ·PCV2感染与天然免疫 | 第30-31页 |
| ·PCV2感染的细胞因子变化 | 第31-32页 |
| ·PCV2 DNA的免疫调节功能 | 第32-33页 |
| ·体液免疫反应 | 第33-35页 |
| 第二章 芯片技术及应用进展 | 第35-46页 |
| 1. 基因芯片 | 第35-42页 |
| ·基因芯片的原理 | 第35-36页 |
| ·基因芯片分类 | 第36-39页 |
| ·基因组(DNA)分析芯片 | 第36-38页 |
| ·RNA水平分析芯片 | 第38-39页 |
| ·基因芯片在病原研究中的运用 | 第39-42页 |
| 2. 蛋白质芯片 | 第42-46页 |
| ·蛋白质芯片的原理 | 第42页 |
| ·蛋白质芯片的分类 | 第42-43页 |
| ·蛋白质芯片的应用 | 第43-44页 |
| ·抗体的筛选 | 第43页 |
| ·病原的检测 | 第43-44页 |
| ·药物作用靶标的筛选 | 第44页 |
| ·生物分子间互作关系的研究 | 第44页 |
| ·在动物医学上的应用 | 第44页 |
| ·蛋白质芯片的优缺点及前景 | 第44-46页 |
| 第二部分 研究内容 | 第46-136页 |
| 第一章 ORF4编码产物蛋白水平及转录水平的鉴定 | 第46-67页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| 1. 材料与方法 | 第47-59页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·病毒,细胞和质粒 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-59页 |
| ·ORF4转录本的Northern blot验证 | 第48-53页 |
| ·ORF4编码蛋白的单克隆抗体制备 | 第53-56页 |
| ·ORF4编码蛋白的多克隆抗体制备 | 第56页 |
| ·ORF4编码蛋白的单/多克隆抗体特性分析 | 第56-59页 |
| ·ORF4蛋白的亚细胞定位观察 | 第59页 |
| 2. 结果 | 第59-65页 |
| ·Northern blot检测PCV2 ORF4转录本 | 第59-61页 |
| ·PCV2 ORF4单克隆抗体和多克隆抗体的制备 | 第61页 |
| ·ORF4抗体的特异性鉴定 | 第61-63页 |
| ·ORF4抗体与PCV2感染的PK15细胞的反应 | 第63页 |
| ·细胞内的分布及表达动态 | 第63-64页 |
| ·ORF4抗体与PCV2感染细胞及pEGFP-ORF4转染细胞裂解物的western-blot检测 | 第64-65页 |
| 3. 讨论 | 第65-67页 |
| 第二章 PCV2 ORF4缺失体构建与ORF4蛋白功能分析 | 第67-90页 |
| 摘要 | 第67-68页 |
| 1. 材料与方法 | 第68-76页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-76页 |
| ·PCV2正常感染性克隆及ORF4缺失突变体的构建 | 第68-69页 |
| ·转染及IFA检测 | 第69页 |
| ·rPCV2和PCV2Δ的传代和TCID_(50)测定 | 第69-70页 |
| ·rPCV2与PCV2Δ的复制能力检测 | 第70-71页 |
| ·rPCV2与PCV2Δ感染细胞的caspase3,8,9活性检测 | 第71-72页 |
| ·BALB/c小鼠攻毒实验 | 第72-76页 |
| 2. 结果 | 第76-87页 |
| ·PCV2感染性克隆构建与病毒拯救 | 第76-77页 |
| ·ORF4蛋白是细胞培养中PCV2复制非必需的 | 第77-78页 |
| ·rPCV2和PCV2Δ感染细胞的Caspase3、8、9的检测结果 | 第78-80页 |
| ·PCV2Δ攻毒后基因稳定性分析 | 第80页 |
| ·临床病症与显微病变 | 第80-81页 |
| ·脾脏中的Cap抗原及ORF4蛋白检测 | 第81-82页 |
| ·血清PCV2病毒载量检测 | 第82-83页 |
| ·脾脏T淋巴细胞亚群计数 | 第83-87页 |
| 3. 讨论 | 第87-90页 |
| 第三章 猪圆环病毒2感染后的宿主免疫器官的基因表达谱分析 | 第90-136页 |
| 摘要 | 第90-91页 |
| 1. 材料与方法 | 第91-105页 |
| ·材料 | 第91-92页 |
| ·方法 | 第92-105页 |
| ·BALB/c小鼠和猪的人工感染 | 第92页 |
| ·BALB/c小鼠和猪的临床症状观察及组织样本收集 | 第92-93页 |
| ·病毒血症检测 | 第93页 |
| ·芯片RNA样品的制备与鉴定 | 第93页 |
| ·利用小鼠和猪的Affymetrix芯片检测mRNA表达谱 | 第93-98页 |
| ·筛选差异基因 | 第98-99页 |
| ·SYBR green法荧光定量PCR验芯片结果 | 第99-103页 |
| ·转录本的分类检索 | 第103页 |
| ·Pathway分析 | 第103页 |
| ·解聚因子destrin和cofilin1的蛋白水平验证 | 第103-105页 |
| 2. 结果 | 第105-130页 |
| ·临床症状及组织病变 | 第105-106页 |
| ·攻毒鼠和猪的病毒血症检测结果 | 第106页 |
| ·差异基因分析结果 | 第106页 |
| ·攻毒鼠和猪的差异基因分类 | 第106-123页 |
| ·攻毒小鼠和猪的差异基因的pathway比较分析 | 第123-126页 |
| ·荧光定量PCR验证芯片结果 | 第126-129页 |
| ·攻毒猪cofilinl和DSTN的蛋白水平验证 | 第129-130页 |
| 3. 讨论 | 第130-136页 |
| ·PCV2感染后机体呈现免疫与炎症反应抑制状态 | 第131-133页 |
| ·PCV2感染导致机体代谢的紊乱 | 第133-134页 |
| ·PCV2感染导致骨架蛋白调节蛋白的上调 | 第134页 |
| ·PCV2感染诱导分化与发育相关因子上调 | 第134-136页 |
| 全文总结 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-150页 |
| 附录A 常用缓冲液及配方 | 第150-156页 |
| 附录B 攻博期间发表或待发表的学术论文 | 第156-157页 |
| 致谢 | 第157页 |
