| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| ·植物转化酶的种类 | 第12页 |
| ·植物转化酶的结构特征 | 第12-13页 |
| ·植物转化酶的理化特性与生理功能 | 第13-16页 |
| ·转化酶的生化特性 | 第13-14页 |
| ·酸性转化酶的生化特性 | 第13-14页 |
| ·中性/碱性转化酶的生化特性 | 第14页 |
| ·转化酶的生理功能 | 第14-16页 |
| ·酸性转化酶的生理功能 | 第14-15页 |
| ·中性/碱性转化酶的生理功能 | 第15-16页 |
| ·生物大分子分离纯化原理与植物转化酶提取纯化 | 第16-18页 |
| ·橡胶生物合成与胶乳转化酶 | 第18-21页 |
| ·橡胶生物合成 | 第18-19页 |
| ·胶乳转化酶 | 第19-21页 |
| ·本研究目的和意义 | 第21-23页 |
| ·本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·材料与试剂 | 第24-25页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·方法与步骤 | 第25-37页 |
| ·橡胶树C-乳清制备 | 第25-26页 |
| ·未开割树胶乳采集 | 第25页 |
| ·复开割树胶乳采集 | 第25页 |
| ·不同品系橡胶树胶乳采集 | 第25页 |
| ·机械伤害处理橡胶树胶乳采集 | 第25页 |
| ·1.5%乙烯利(ET)刺激橡胶树胶乳采集 | 第25页 |
| ·甲基茉莉酸(JA)刺激橡胶树胶乳采集 | 第25页 |
| ·脱落酸(ABA)刺激橡胶树胶乳采集 | 第25页 |
| ·细胞分裂素(CTK)刺激橡胶树胶乳采集 | 第25-26页 |
| ·生长素(2,4-D)刺激橡胶树胶乳采集 | 第26页 |
| ·赤霉素(GA)刺激橡胶树胶乳采集 | 第26页 |
| ·水杨酸(SA)刺激橡胶树胶乳采集 | 第26页 |
| ·不同组织橡胶树材料采集 | 第26页 |
| ·胶乳产量测定 | 第26页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第26-27页 |
| ·酶活性测定 | 第27-28页 |
| ·标准曲线绘制 | 第27页 |
| ·Inv的酶活性测定 | 第27-28页 |
| ·胶乳蔗糖含量测定 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第28-29页 |
| ·蛋白质染色 | 第29-30页 |
| ·银染色 | 第29页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第29-30页 |
| ·KCI染色 | 第30页 |
| ·凝胶图像扫描与分析 | 第30页 |
| ·橡胶树胶乳C-乳清N/A-Inv分级沉淀 | 第30-31页 |
| ·橡胶树胶乳N/A-Inv的SAS分级沉淀 | 第30-31页 |
| ·透析 | 第31页 |
| ·Sephacryl S-300 HR柱层析 | 第31-32页 |
| ·DEAE-Sephacel柱层析 | 第32页 |
| ·N/A-Inv分子量测定 | 第32页 |
| ·N/A-Inv糖基化修饰检测 | 第32-33页 |
| ·蛋白质的原位酶解 | 第33页 |
| ·MALDI-TOF质谱分析 | 第33页 |
| ·肽质指纹图谱分析及蛋白质数据库的搜索 | 第33页 |
| ·N/A-Inv生化特性 | 第33-35页 |
| ·最适pH测定 | 第34页 |
| ·最适温度测定 | 第34页 |
| ·米氏常数Km的测定 | 第34页 |
| ·N/A-Inv的抑制研究 | 第34-35页 |
| ·HbNIN2基因的原核表达与重组蛋白纯化 | 第35-37页 |
| ·HbNIN2多克隆抗体的分离纯化 | 第36页 |
| ·HbNIN2多克隆抗体的DEAE-Sephacel柱层析 | 第36页 |
| ·western blotting蛋白表达分析 | 第36-37页 |
| ·HbNIN2多克隆抗体特异性检验 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-65页 |
| ·温度和pH值对C-乳清中N/A-Inv活性的影响 | 第37-39页 |
| ·温度对C-乳清中N/A-Inv酶活性的影响 | 第37-38页 |
| ·温度对不同C-乳清浓度下N/A-Inv酶活性影响 | 第38页 |
| ·pH对C-乳清N/A-Inv的活性影响 | 第38-39页 |
| ·橡胶树胶乳C-乳清N/A-Inv的分离纯化 | 第39-50页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第39页 |
| ·透析与超滤 | 第39页 |
| ·Sephracyls-300分子筛柱层析 | 第39-40页 |
| ·DEAE-Sephacel离子交换柱层析 | 第40-41页 |
| ·橡胶树C-乳清N/A-Inv纯化过程SDS-PAGE检测 | 第41-43页 |
| ·橡胶树C-乳清N/A-Inv亚基分子量大小测定 | 第43-44页 |
| ·N/A-Inv糖基化修饰检测 | 第44页 |
| ·目标蛋白的质谱分析鉴定 | 第44-50页 |
| ·纯化N/A-Inv的生化特性 | 第50-54页 |
| ·温度对N/A-Inv的活性影响 | 第50页 |
| ·pH对N/A-Inv的活性影响 | 第50-51页 |
| ·不同蔗糖浓度对N/A-Inv活性影响 | 第51页 |
| ·Lineweaver-Burk计算N/A-Inv的Km值 | 第51-52页 |
| ·不同产物在不同底物浓度对N/A-Inv酶活的影响 | 第52-53页 |
| ·不同金属离子及生化试剂对N/A-Inv的影响 | 第53-54页 |
| ·HbNIN2蛋白表达分析 | 第54-65页 |
| ·HbNIN2抗血清DEAE-Sephacel柱层析分离纯化 | 第54-55页 |
| ·HbNIN2抗体的特异性检验 | 第55-56页 |
| ·割胶对未开割树胶乳C-乳清HbNIN2蛋白的表达影响 | 第56-58页 |
| ·割胶对复开割树胶乳C-乳清中HbNIN2蛋白表达的影响 | 第58-59页 |
| ·不同橡胶品系C-乳清HbNIN2的蛋白表达 | 第59-60页 |
| ·伤害刺激对胶乳C-乳清HbNIN2蛋白表达的影响 | 第60页 |
| ·甲基茉莉酸(JA)刺激对胶乳C-乳清HbNIN2蛋白表达的影响 | 第60-61页 |
| ·乙烯利(ET)刺激对胶乳C-乳清HbNIN2蛋白表达的影响 | 第61页 |
| ·细胞分裂素(CTK)刺激对胶乳C-乳清HbNIN2蛋白表达的影响 | 第61-62页 |
| ·赤霉素(GA)处理对胶乳C-乳清HbNIN2的蛋白表达的影响 | 第62-63页 |
| ·水杨酸(SA)刺激对胶乳C-乳清HbNIN2蛋白表达的影响 | 第63页 |
| ·2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)刺激对胶乳C-乳清HbNIN2蛋白表达的影响 | 第63-64页 |
| ·脱落酸(ABA)刺激对胶乳C-乳清HbNIN2蛋白表达的影响 | 第64页 |
| ·不同组织HbNIN2的蛋白表达 | 第64-65页 |
| 4 结论与讨论 | 第65-69页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| ·结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 作者在读期间科研成果简介 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
