| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| ·蔗糖转运蛋白的研究进展 | 第11-14页 |
| ·蔗糖转运蛋白的结构 | 第11页 |
| ·蔗糖转运蛋白的分类及功能 | 第11-13页 |
| ·SUT1型亚家族 | 第12页 |
| ·SUT2型亚家族 | 第12页 |
| ·SUT4型亚家族 | 第12-13页 |
| ·蔗糖转运蛋白基因的表达调控 | 第13-14页 |
| ·转录水平的调节 | 第13页 |
| ·转录后水平的调节 | 第13-14页 |
| ·植物启动子的研究进展 | 第14-18页 |
| ·启动子的结构特征 | 第14页 |
| ·启动子的种类 | 第14-15页 |
| ·启动子克隆方法 | 第15-16页 |
| ·文库筛选克隆启动子 | 第15页 |
| ·基于PCR技术克隆启动子 | 第15-16页 |
| ·启动子功能的分析方法 | 第16-18页 |
| ·生物信息学法 | 第16页 |
| ·转基因分析法 | 第16-17页 |
| ·瞬时表达分析法 | 第17页 |
| ·突变分析法 | 第17页 |
| ·凝胶阻滞实验(EMSA) | 第17页 |
| ·酵母单杂交技术 | 第17页 |
| ·染色体免疫共沉淀技术 | 第17-18页 |
| ·启动子研究的目的意义 | 第18页 |
| ·本研究的目的意义 | 第18-20页 |
| ·研究技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-42页 |
| ·材料与试剂 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·载体及菌株 | 第21页 |
| ·生化试剂 | 第21页 |
| ·方法与步骤 | 第21-42页 |
| ·橡胶树SUT基因(HbSUTs)启动子的克隆 | 第21-27页 |
| ·构建基于Adapter-PCR的启动子克隆文库 | 第21-24页 |
| ·HbSUT基因特异性引物设计 | 第24页 |
| ·启动子克隆文库中的扩增 | 第24-26页 |
| ·PCR扩增产物回收 | 第26页 |
| ·连接 | 第26页 |
| ·转化过程 | 第26-27页 |
| ·菌落PCR鉴定及测序 | 第27页 |
| ·HbSUT3和HbSUT5基因启动子组织特异性分析 | 第27-37页 |
| ·含有HbSUT3和HbSUT5启动子片段的植物表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·农杆菌介导的转基因拟南芥植物的获得 | 第28-30页 |
| ·转基因拟南芥阳性植株的PCR鉴定分析 | 第30页 |
| ·转基因拟南芥的GUS组织染色分析 | 第30-31页 |
| ·转基因拟南芥的不同组织GUS荧光定量分析 | 第31-32页 |
| ·橡胶树叶片与嫩茎组织中mRNA原位杂交分析 | 第32-37页 |
| ·HbSUT3和HbSUT5基因启动子的表达分析 | 第37-42页 |
| ·实时荧光定量PCR分析橡胶树中HbSUT3和HbSUT5基因的表达 | 第37-41页 |
| ·不同处理条件下HbSUT3和HbSUT5启动子转基因拟南芥GUS荧光定量检测分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-66页 |
| ·六个HbSUT基因启动子的克隆 | 第42-53页 |
| ·橡胶树叶片DNA的提取 | 第42页 |
| ·限制性内切酶对橡胶树基因组DNA的酶切 | 第42-43页 |
| ·启动子克隆 | 第43-44页 |
| ·启动子长度的优化 | 第44-50页 |
| ·HbSUT基因启动子序列的生物信息学分析 | 第50-53页 |
| ·启动子同源性分析 | 第50-51页 |
| ·启动子GC含量分析 | 第51页 |
| ·核心启动子及转录起始位点预测 | 第51-52页 |
| ·启动子顺式作用元件的分析 | 第52-53页 |
| ·HbSUT3和HbSUT5启动子组织特异性分析 | 第53-59页 |
| ·转基因拟南芥中HbSUT3和HbSUT5启动子的组织特异性分析 | 第53-57页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·转基因拟南芥中阳性植株的筛选 | 第55-56页 |
| ·转基因拟南芥中GUS组织染色分析 | 第56页 |
| ·转基因拟南芥中不同组织中GUS荧光定量分析 | 第56-57页 |
| ·橡胶树中HbSUT3与HbSUT5启动子的组织特异性分析 | 第57-59页 |
| ·原位杂交探针的制备 | 第57-58页 |
| ·橡胶树嫩茎中HbSUT3和HbSUT5 mRNA原位杂交 | 第58-59页 |
| ·橡胶树叶片HbSUT3和HbSUT5 mRNA原位杂交 | 第59页 |
| ·HbSUT3和HbSUT5基因表达调控与启动子功能分析 | 第59-66页 |
| ·橡胶树中不同激素处理对HbSUT3和HbSUT5基因表达的影响 | 第59-62页 |
| ·不同激素处理后胶乳RNA的提取 | 第59-60页 |
| ·不同激素对HbSUT3基因表达的影响 | 第60-61页 |
| ·不同激素对HbSUT5基因表达的影响 | 第61-62页 |
| ·转基因拟南芥中不同处理对HbSUT3和HbSUT5启动子表达的影响 | 第62-66页 |
| ·植物激素对转基因拟南芥中HbSUT3启动GUS表达活性的影响 | 第62-63页 |
| ·非生物胁迫对转基因拟南芥中HbSUT3启动GUS表达活性的影响 | 第63-64页 |
| ·植物激素对转基因拟南芥中HbSUT5启动GUS表达活性的影响 | 第64-65页 |
| ·非生物胁迫对转基因拟南芥中HbSUT5启动GUS表达活性的影响 | 第65-66页 |
| 4 结论与讨论 | 第66-70页 |
| ·结论 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-70页 |
| ·关于橡胶树HbSUT基因启动子的克隆 | 第66-67页 |
| ·关于橡胶树HbSUT基因启动子序列的生物信息学分析 | 第67-68页 |
| ·关于拟南芥转基因实验 | 第68页 |
| ·关于HbSUT3和HbSUT5基因启动子组织特异性分析 | 第68页 |
| ·关于HbSUT3和HbSUT5基因启动子功能分析 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 附录 | 第77-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
