| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-27页 |
| 1 重金属概述 | 第11-16页 |
| ·重金属及其危害 | 第11页 |
| ·土壤重金属污染的来源 | 第11页 |
| ·重金属铅简介 | 第11-16页 |
| ·铅及铅污染来源 | 第11-12页 |
| ·铅代谢及对人体的危害 | 第12页 |
| ·铅对植物的毒害作用 | 第12-14页 |
| ·铅对植物生长发育的影响 | 第12-13页 |
| ·铅对植物光合作用的影响 | 第13页 |
| ·铅对植物酶活性的影响 | 第13-14页 |
| ·铅胁迫下植物的抗性机理 | 第14-16页 |
| ·Pb~(2+)的区域化分布 | 第14页 |
| ·根系分泌物的影响 | 第14页 |
| ·限制Pb~(2+)的跨膜运输 | 第14-15页 |
| ·重金属螯合蛋白的解毒作用 | 第15页 |
| ·抗氧化系统的防御作用 | 第15-16页 |
| 2 植物miRNA概述 | 第16-25页 |
| ·植物miRNA的发现 | 第16页 |
| ·植物miRNA的生物合成机制 | 第16-17页 |
| ·植物miRNA的作用机制 | 第17页 |
| ·植物miRNA的特征 | 第17-18页 |
| ·植物miRNA的研究方法 | 第18-22页 |
| ·植物miRNA的筛选 | 第18-19页 |
| ·植物miRNA的表达检测 | 第19-22页 |
| ·Northern杂交(Northern blotting) | 第19页 |
| ·原位杂交(in situ hybridization,ISH) | 第19-20页 |
| ·miRNA芯片(miRNA chip) | 第20页 |
| ·实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR) | 第20-22页 |
| ·植物miRNA靶基因的研究方法 | 第22-24页 |
| ·靶基因的寻找 | 第22-23页 |
| ·靶基因的真实性验证 | 第23-24页 |
| ·植物重金属胁迫相关miRNA的研究进展 | 第24-25页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 4 实验技术路线 | 第26-27页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第27-40页 |
| 1 实验材料 | 第27-30页 |
| ·供试玉米材料 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·试剂盒 | 第27页 |
| ·酶类及生化试剂 | 第27页 |
| ·主要试剂配方 | 第27-28页 |
| ·PCR引物 | 第28-29页 |
| ·miRNA的荧光定量PCR引物 | 第28页 |
| ·miRNA靶基因的半定量RT-PCR引物 | 第28-29页 |
| ·使用的数据库及软件 | 第29页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-40页 |
| ·样品的制备与获得 | 第30-34页 |
| ·材料的培养与处理 | 第30-31页 |
| ·样品总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·样品总RNA的cDNA模板制备 | 第32-33页 |
| ·样品miRNA的cDNA模板制备 | 第33-34页 |
| ·miRNA的靶基因预测 | 第34页 |
| ·引物设计及合成 | 第34页 |
| ·miRNA的真实性鉴定 | 第34-35页 |
| ·miRNA的荧光定量PCR检测 | 第35-36页 |
| ·标准品的制备及标准曲线的制作 | 第35页 |
| ·实时荧光定量PCR(FQ-PCR) | 第35页 |
| ·统计分析 | 第35-36页 |
| ·miRNA靶基因的半定量RT-PCR检测 | 第36-38页 |
| ·引物的特异性检测 | 第36页 |
| ·PCR反应条件的优化 | 第36-37页 |
| ·各样品模板浓度的均一化 | 第37页 |
| ·半定量RT-PCR检测 | 第37-38页 |
| ·主要抗氧化酶的酶活测定 | 第38-40页 |
| ·粗酶液的提取 | 第38页 |
| ·SOD活性的测定 | 第38页 |
| ·POD活性的测定 | 第38-40页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第40-59页 |
| 1 总RNA的提取与逆转录效果检测 | 第40-41页 |
| ·总RNA的提取效果检测 | 第40页 |
| ·总RNA逆转录的基因组cDNA检测图 | 第40-41页 |
| ·miRNA加尾逆转录的cDNA检测图 | 第41页 |
| 2 miRNA的定量表达分析 | 第41-50页 |
| ·miRNA的真实性鉴定 | 第41-42页 |
| ·荧光定量标准曲线 | 第42-43页 |
| ·荧光定量熔解曲线 | 第43-44页 |
| ·miRNA的相对定量表达分析 | 第44-50页 |
| ·zma-miR156b的相对表达量 | 第45页 |
| ·zma-miR156k的相对表达量 | 第45-46页 |
| ·zma-miR156new~*的相对表达量 | 第46页 |
| ·zma-miR166d的相对表达量 | 第46-47页 |
| ·zma-miR167c的相对表达量 | 第47页 |
| ·zma-miR167f的相对表达量 | 第47-48页 |
| ·zma-miR168b的相对表达量 | 第48页 |
| ·zm-miR171d/e/i/j的相对表达量 | 第48-49页 |
| ·zma-miR319的相对表达量 | 第49页 |
| ·zma-miR28a~*的相对表达量 | 第49-50页 |
| ·zma-miR51~*的相对表达量 | 第50页 |
| 3 miRNA的靶基因预测结果 | 第50-54页 |
| 4 miRNA靶基因的半定量RT-PCR分析 | 第54-57页 |
| ·各样品模板均一化 | 第54页 |
| ·miRNA靶基因半定量RT-PCR结果 | 第54-57页 |
| 5 主要抗氧化酶的酶活分析 | 第57-59页 |
| ·SOD酶活分析 | 第57页 |
| ·POD酶活分析 | 第57-59页 |
| 第四部分 讨论 | 第59-65页 |
| 1 miRNA表达检测方法的比较 | 第59页 |
| 2 重金属Pb胁迫下miRNA介导的表达调控分析 | 第59-62页 |
| 3 主要抗氧化酶对Pb胁迫的响应特点 | 第62页 |
| 4 miRNA介导的玉米抗Pb胁迫分子机制探讨 | 第62-64页 |
| 5 今后的研究方向 | 第64-65页 |
| 第五部分 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
