全细胞脂肪酶生物催化剂的构建及其在生物转化中的应用
| 摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 名词缩写表 | 第17-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-38页 |
| ·脂肪酶的研究进展 | 第18-23页 |
| ·微生物脂肪酶的来源 | 第19-20页 |
| ·结构和催化特性 | 第20-21页 |
| ·催化机制 | 第21-23页 |
| ·脂肪酶的非水相催化 | 第23-26页 |
| ·构象和活性变化 | 第23-24页 |
| ·脂肪酶的分子印迹 | 第24-26页 |
| ·根霉脂肪酶的研究进展 | 第26-29页 |
| ·根霉脂肪酶的分子生物学研究进展 | 第27-28页 |
| ·根霉脂肪酶的克隆表达 | 第28-29页 |
| ·全细胞生物催化剂在生物柴油的应用 | 第29-36页 |
| ·生物柴油的研究进展 | 第29-32页 |
| ·全细胞生物催化剂 | 第32-36页 |
| ·研究目的和研究内容 | 第36-38页 |
| ·研究目的 | 第36-37页 |
| ·研究内容 | 第37-38页 |
| 第2章 全细胞脂肪酶生物催化剂的构建 | 第38-59页 |
| ·材料与仪器 | 第38-40页 |
| ·菌种和质粒 | 第38-39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第39页 |
| ·主要仪器和设备 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-46页 |
| ·脂肪酶基因序列的设计合成 | 第40-41页 |
| ·PCR条件 | 第41页 |
| ·质粒的提取 | 第41-42页 |
| ·凝胶回收 | 第42页 |
| ·酶切和连接 | 第42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备和转化 | 第43-44页 |
| ·DNA乙醇沉淀 | 第44页 |
| ·酵母感受态细胞制备和电转化 | 第44-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-58页 |
| ·脂肪酶ROL基因和蛋白分析 | 第46-48页 |
| ·脂肪酶CALB基因和蛋白分析 | 第48-49页 |
| ·ROL酿酒酵母和毕赤酵母展示表达载体构建 | 第49-53页 |
| ·CALB酿酒酵母和毕赤酵母展示表达载体构建 | 第53-55页 |
| ·重组酵母菌的构建 | 第55-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第3章 全细胞脂肪酶生物催化剂的酶学性质 | 第59-71页 |
| ·材料与仪器 | 第60页 |
| ·菌种和培养基 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器和设备 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-64页 |
| ·水解圈法筛选阳性重组子 | 第60-61页 |
| ·培养基比较 | 第61页 |
| ·生长曲线 | 第61页 |
| ·全细胞脂肪酶生物催化剂的制备 | 第61页 |
| ·水解酶活的标准曲线 | 第61-62页 |
| ·水解酶活的测定 | 第62页 |
| ·酶学性质测定 | 第62-63页 |
| ·酯化酶活的标准曲线 | 第63-64页 |
| ·酯化酶活的测定 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-69页 |
| ·水解圈法筛选阳性克隆 | 第64-65页 |
| ·培养基比较 | 第65页 |
| ·生长曲线 | 第65-66页 |
| ·水解酶活 | 第66-67页 |
| ·酶学性质 | 第67-69页 |
| ·酯化酶活 | 第69页 |
| ·小结 | 第69-71页 |
| 第4章 全细胞脂肪酶生物催化剂在水相中的应用 | 第71-77页 |
| ·材料与仪器 | 第72-73页 |
| ·菌种和培养基 | 第72页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·主要仪器和设备 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-74页 |
| ·三丁酸甘油酯的水解试验 | 第73页 |
| ·丁酸液相检测 | 第73页 |
| ·丁酸液相检测的标准曲线 | 第73-74页 |
| ·丁酸转化率计算 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-76页 |
| ·样品与标准品的液相图谱 | 第74-75页 |
| ·丁酸转化率 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 第5章 分子印迹法对全细胞脂肪酶生物催化剂的影响 | 第77-85页 |
| ·材料与仪器 | 第77-78页 |
| ·菌种和培养基 | 第77页 |
| ·主要试剂 | 第77-78页 |
| ·实验方法 | 第78-80页 |
| ·分子印迹法制备全细胞脂肪酶生物催化剂 | 第78页 |
| ·分子印迹对水解酶活的影响 | 第78页 |
| ·分子印迹对水相中热稳定性的影响 | 第78页 |
| ·醋酸铜法测定油酸标准曲线 | 第78-79页 |
| ·油酸甲酯的生物转化反应 | 第79-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-84页 |
| ·分子印迹对水解酶活的影响 | 第80-81页 |
| ·分子印迹对水相中热稳定性的影响 | 第81-82页 |
| ·ROL游离酶催化油酸甲酯合成 | 第82-83页 |
| ·分子印迹对生物转化油酸甲酯的影响 | 第83页 |
| ·油酸浓度对油酸甲酯转化率的影响 | 第83-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 第6章 全细胞脂肪酶生物催化剂制备生物柴油 | 第85-98页 |
| ·材料与仪器 | 第86页 |
| ·菌种和培养基 | 第86页 |
| ·主要试剂 | 第86页 |
| ·主要仪器和设备 | 第86页 |
| ·实验方法 | 第86-88页 |
| ·分子印迹对生物转化生物柴油的影响 | 第86-87页 |
| ·大豆油浓度对生物柴油转化率的影响 | 第87页 |
| ·反应时间对生物柴油转化率的影响 | 第87-88页 |
| ·温度对生物转化生物柴油的影响 | 第88页 |
| ·全细胞脂肪酶生物催化剂的回收利用 | 第88页 |
| ·全细胞脂肪酶生物催化剂的耐有机试验 | 第88页 |
| ·结果与分析 | 第88-96页 |
| ·分子印迹对生物转化生物柴油的影响 | 第88-90页 |
| ·大豆油浓度对生物柴油转化率的影响 | 第90-91页 |
| ·反应时间对生物柴油转化率的影响 | 第91-92页 |
| ·温度对生物转化生物柴油的影响 | 第92-96页 |
| ·全细胞脂肪酶生物催化剂的回收利用 | 第96页 |
| ·全细胞脂肪酶生物催化剂的耐有机试验 | 第96页 |
| ·小结 | 第96-98页 |
| 第7章 结论与展望 | 第98-101页 |
| ·本论文的主要结论 | 第98-99页 |
| ·主要创新成果 | 第99-100页 |
| ·后续研究及展望 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-114页 |
| 附件 | 第114-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 个人简介及攻读博士学位期间的科研成果 | 第118-120页 |
