| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-18页 |
| 1 传染性支气管炎研究进展 | 第9-14页 |
| ·传染性支气管炎的概述 | 第9页 |
| ·传染性支气管炎的流行病学 | 第9页 |
| ·传染性支气管炎病毒（IBV）的病原学特征 | 第9-10页 |
| ·传染性支气管炎病毒(IBV)的基因组结构 | 第10-11页 |
| ·IBV 的结构蛋白及生物学功能 | 第11-12页 |
| ·传染性支气管炎病毒的侵入、释放机制 | 第12-13页 |
| ·传染性支气管炎病毒疫苗研究进展 | 第13-14页 |
| 2 IBVZZ2 004 株病毒的研究进展 | 第14-16页 |
| ·IBVZZ2004 株病毒的结构特征 | 第15页 |
| ·IBVZZ2004 株病毒的生长特性 | 第15页 |
| ·IBVZZ2004 株病毒的鉴定 | 第15页 |
| ·IBVZZ2004 株病毒的基因组结构特征 | 第15-16页 |
| ·IBVZZ2004 株病毒检测方法的建立 | 第16页 |
| 3 杆状病毒表达系统 | 第16-17页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第16页 |
| ·BAC-TO-BAC 杆状病毒表达系统 | 第16-17页 |
| 4 本实验的目的与意义 | 第17-18页 |
| 引言 | 第18-20页 |
| 第二章 IBVZZ2004 株 S1 和 M 基因在 SF9 昆虫细胞中的表达 | 第20-44页 |
| 1 试验材料 | 第20-21页 |
| ·IBVZZ2004 毒株 | 第20页 |
| ·试验动物 | 第20页 |
| ·菌株、载体、细胞系 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·所用溶液及其配制 | 第21页 |
| ·主要试验设备 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-32页 |
| ·IBVZZ2004 株病毒的繁殖与浓缩 | 第21页 |
| ·IBVZZ2004 株病毒 RNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·IBVZZ2004 株 S1 和 M 基因的合成 | 第22-24页 |
| ·引物设计与合成 | 第22页 |
| ·RT-PCR 扩增 S1 和 M 基因 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定 PCR 产物 | 第23页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第23-24页 |
| ·IBVZZ2004 株 S1 和 M 基因重组转移载体的构建 | 第24-27页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·pFastBacHTA 转移载体的提取 | 第24-25页 |
| ·S1、M 基因和 pFastBacHTA 转移载体的双酶切 | 第25页 |
| ·酶切产物的回收、纯化 | 第25页 |
| ·酶切后 S1、M 基因分别与转移载体 pFastBacHTA 连接 | 第25-26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·重组转移载体的提取 | 第26页 |
| ·重组转移载体的鉴定 | 第26-27页 |
| ·IBVZZ2004 株 S1 和 M 基因重组穿梭载体的构建 | 第27-29页 |
| ·大肠杆菌 DH10 Bac 感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·重组转移载体 pFastBacHTA- S1 和 pFastBacHTA- M 的转化 | 第28页 |
| ·重组穿梭载体 Bacmid-S1 和 Bacmid-M 的提取 | 第28页 |
| ·重组穿梭载体 Bacmid-S1 和 Bacmid-M 的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组杆状病毒的获得和鉴定 | 第29-30页 |
| ·sf9 昆虫细胞的培养 | 第29页 |
| ·重组穿梭载体转染 sf9 昆虫细胞获得重组杆状病毒 | 第29-30页 |
| ·重组杆状病毒的扩增 | 第30页 |
| ·重组杆状病毒显微镜检测 | 第30页 |
| ·重组杆状病毒 RT-PCR 检测 | 第30页 |
| ·表达蛋白的检测和鉴定 | 第30-32页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第30-31页 |
| ·Western–blot 检测 | 第31-32页 |
| ·免疫荧光检测 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-40页 |
| ·RT-PCR 扩增 S1 和 M 基因 | 第32-33页 |
| ·回收纯化的 S1 和 M 基因 | 第33-34页 |
| ·重组转移载体 PFASTBACHTA-S1 和 PFASTBACHTA-M 的构建 | 第34-35页 |
| ·重组转移载体的构建 | 第34页 |
| ·重组转移载体 pFastBacHTA-S1 的双酶切和 PCR 鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组转移载体 pFastBacHTA-M 的双酶切和 PCR 鉴定 | 第35页 |
| ·重组穿梭载体 BACMID-S1 和 BACMID-M 的构建 | 第35-36页 |
| ·重组穿梭载体的构建 | 第35页 |
| ·重组穿梭载体 Bacmid-S1 的 PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组穿梭 Bacmid-M 载体的 PCR 鉴定 | 第36页 |
| ·重组杆状病毒的鉴定 | 第36-38页 |
| ·重组杆状病毒 Bac-S1 和 Bac-M 感染 sf9 细胞后显微镜观察 | 第36-37页 |
| ·重组杆状病毒 RT-PCR 检测 | 第37-38页 |
| ·表达蛋白的检测 | 第38-40页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第38页 |
| ·表达蛋白的 Western-blot 检测 | 第38-39页 |
| ·表达蛋白的间接免疫荧光检测 | 第39-40页 |
| 4 讨论与结论 | 第40-44页 |
| ·讨论 | 第40-43页 |
| ·结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 英文摘要 | 第51-53页 |
| 附录1 PFASTBACTMHTA 杆状病毒转移载体图谱 | 第53-54页 |
| 附录2 所用溶液及其配制 | 第54-56页 |
| 附录3 重组穿梭载体构建示意图 | 第56页 |
