| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| ·荔枝霜疫霉菌研究概况 | 第12-13页 |
| ·荔枝霜疫霉菌简介 | 第12页 |
| ·荔枝霜疫霉菌的致病机理研究概况 | 第12页 |
| ·荔枝霜疫霉菌防治措施 | 第12-13页 |
| ·真菌原生质体的研究概况 | 第13-18页 |
| ·原生质体制备 | 第14-15页 |
| ·原生质体再生 | 第15页 |
| ·原生质体转化 | 第15-18页 |
| ·PEG-CaCl_2 介导的真菌遗传转化 | 第15-16页 |
| ·电激转化系统 | 第16页 |
| ·限制性内切酶介导的真菌遗传转化 | 第16-17页 |
| ·用于原生质体转化的选择标记 | 第17-18页 |
| ·GFP 基因在真菌中的应用 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 荔枝霜疫霉菌的生物学特性 | 第20-33页 |
| ·材料与方法 | 第20-23页 |
| ·供试菌株 | 第20页 |
| ·供试培养基 | 第20页 |
| ·霜疫霉菌形态特征 | 第20页 |
| ·荔枝霜疫霉菌生长及产孢条件研究 | 第20-21页 |
| ·不同培养基对荔枝霜疫霉菌生长及产孢的影响 | 第20-21页 |
| ·不同光照条件对荔枝霜疫霉菌生长及产孢的影响 | 第21页 |
| ·不同温度对荔枝霜疫霉菌生长及产孢的影响 | 第21页 |
| ·不同pH 值对荔枝霜疫霉菌生长及产孢的影响 | 第21页 |
| ·荔枝霜疫霉菌孢子致死温度的测定 | 第21页 |
| ·荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的条件测定 | 第21-22页 |
| ·不同培养基对荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的影响 | 第21页 |
| ·不同温度对霜疫霉菌孢子囊萌发的影响 | 第21-22页 |
| ·不同pH 值的培养基上所产生的孢子囊对其萌发的影响 | 第22页 |
| ·不同培养时间对霜疫霉菌孢子囊萌发的影响 | 第22页 |
| ·不同营养成分对霜疫霉菌孢子囊萌发的影响 | 第22页 |
| ·荔枝霜疫霉菌侵染条件的测定 | 第22-23页 |
| ·不同温度对荔枝霜疫霉菌侵染荔枝的影响 | 第22页 |
| ·霜疫霉菌对不同成熟度荔枝的侵染情况 | 第22-23页 |
| ·结果和分析 | 第23-31页 |
| ·霜疫霉菌形态学特征 | 第23-24页 |
| ·荔枝霜疫霉菌生长及产孢条件研究 | 第24-27页 |
| ·不同培养基对荔枝霜疫霉菌生长及产孢的影响 | 第24页 |
| ·不同温度对荔枝霜疫霉菌生长及产孢的影响 | 第24-25页 |
| ·不同光照条件对荔枝霜疫霉菌生长及产孢的影响 | 第25-26页 |
| ·不同pH 值对荔枝霜疫霉菌生长及产孢的影响 | 第26-27页 |
| ·荔枝霜疫霉菌致死温度的测定 | 第27页 |
| ·环境因子对荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的影响 | 第27-30页 |
| ·不同光照条件对霜疫霉菌孢子囊萌发的影响 | 第27页 |
| ·不同培养时间对霜疫霉菌孢子囊萌发的影响 | 第27页 |
| ·不同温度对荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的影响 | 第27-29页 |
| ·不同pH 值的培养基上产生的孢子囊对其萌发的影响 | 第29-30页 |
| ·不同营养成分对荔枝霜疫霉菌孢子囊萌发的影响 | 第30页 |
| ·不同条件对荔枝霜疫霉菌侵染荔枝的影响 | 第30-31页 |
| ·不同温度对霜疫霉菌侵染荔枝的影响 | 第30页 |
| ·霜疫霉菌对不同成熟度荔枝的侵染情况 | 第30-31页 |
| ·小结和讨论 | 第31-33页 |
| 3 荔枝霜疫霉菌遗传转化体系的建立 | 第33-54页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·试剂盒 | 第35页 |
| ·酶 | 第35页 |
| ·荔枝霜疫霉菌的培养 | 第35页 |
| ·荔枝霜疫霉菌原生质体制备 | 第35-36页 |
| ·酶系组成对原生质体产量的影响 | 第35-36页 |
| ·崩溃酶浓度对原生质体产量的影响 | 第36页 |
| ·酶反应时间对原生质体产量的影响 | 第36页 |
| ·不同酶解温度对原生质体产量的影响 | 第36页 |
| ·不同培养基所产生的菌丝对其原生质体产量的影响 | 第36页 |
| ·不同菌龄对原生质体产量的影响 | 第36页 |
| ·荔枝霜疫霉菌原生质体再生 | 第36-37页 |
| ·酶反应时间对原生质体再生的影响 | 第37页 |
| ·不同菌龄对原生质体再生的影响 | 第37页 |
| ·不同再生培养基对原生质体再生的影响 | 第37页 |
| ·渗透压稳定剂的种类和浓度对原生质体再生的影响 | 第37页 |
| ·原生质体再生菌株的生长性状 | 第37页 |
| ·荔枝霜疫霉菌的gfp 基因转化 | 第37-41页 |
| ·质粒的提取 | 第37-38页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第38页 |
| ·T-gfp 载体构建 | 第38-40页 |
| ·gfp 基因PCR 扩增 | 第38页 |
| ·目的DNA 与载体pMD18 连接 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第39页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组克隆的PCR 快速鉴定 | 第40页 |
| ·DNA 序列测定及分析 | 第40页 |
| ·pHAMT35G-gfp 载体的构建 | 第40页 |
| ·荔枝霜疫霉菌对G418 的敏感性测定 | 第40页 |
| ·荔枝霜疫霉菌原生质体的转化 | 第40-41页 |
| ·转化子验证 | 第41页 |
| ·选择培养基上的再次筛选 | 第41页 |
| ·荔枝霜疫霉菌转化子DNA 的提取 | 第41页 |
| ·转化子的PCR 验证 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-51页 |
| ·荔枝霜疫霉菌原生质体制备 | 第41-45页 |
| ·原生质体的形成和释放过程 | 第41-42页 |
| ·不同酶种类对原生质体产量的影响 | 第42-43页 |
| ·崩溃酶浓度对原生质体产量的影响 | 第43页 |
| ·酶解时间对原生质体产量的影响 | 第43页 |
| ·不同酶解温度对原生质体产量的影响 | 第43-44页 |
| ·不同菌龄对原生质体产量的影响 | 第44页 |
| ·不同营养成分对原生质体产量的影响 | 第44-45页 |
| ·荔枝霜疫霉菌原生质体再生 | 第45-48页 |
| ·原生质体再生菌株的生物学性状 | 第45页 |
| ·酶反应时间对原生质体再生的影响 | 第45-47页 |
| ·不同菌龄对原生质体再生的影响 | 第47页 |
| ·渗透压稳定剂种类和浓度对原生质体再生的影响 | 第47-48页 |
| ·不同再生培养基对原生质体再生的影响 | 第48页 |
| ·荔枝霜疫霉菌的gfp 基因转化 | 第48-51页 |
| ·用于转化子筛选的G418 浓度的确定 | 第48页 |
| ·gfp 基因的PCR 扩增 | 第48页 |
| ·重组质粒T-gfp 克隆子PCR 和酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组质粒pHTAM35G-gfp 的PCR 和酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·转化子的形态特征 | 第50页 |
| ·pTH209 和pHAMT35G-gfp 共转化野生菌克隆子的PCR 鉴定 | 第50页 |
| ·转化子的荧光检测 | 第50-51页 |
| ·小结与讨论 | 第51-54页 |
| 4 结论与讨论 | 第54-55页 |
| ·主要研究结果 | 第54页 |
| ·特色 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
