| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| ·中华鲟生物学特征和资源现状简介 | 第13页 |
| ·中华鲟性腺发育及其繁殖生物学简介 | 第13-15页 |
| ·生殖细胞 | 第15-17页 |
| ·生殖细胞的基本概念 | 第15页 |
| ·鱼类生殖细胞的基本特征 | 第15页 |
| ·生殖细胞的鉴定 | 第15-17页 |
| ·几个生殖细胞发育相关基因的研究现状 | 第17-20页 |
| ·第Ⅴ类 POU 基因家族研究概况 | 第17-18页 |
| ·nanos 基因家族研究概况 | 第18-19页 |
| ·DAZ 家族基因研究概况 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 中华鲟 pou2 基因 cDNA 克隆和表达分析 | 第21-44页 |
| 1. 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·主要实验仪器 | 第21-24页 |
| ·RNA 提取 | 第24页 |
| ·cDNA 模板制备 | 第24-26页 |
| ·PrimeScript RT reagent Kit With gDNA Eraser 逆转录总 RNA | 第24-25页 |
| ·SMART cDNA 的合成 | 第25-26页 |
| ·合成 SMART cDNA 第一链 | 第26页 |
| ·中华鲟 pou2 基因保守区片段的克隆 | 第26-27页 |
| ·中华鲟 pou2 基因简并引物 PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物回收 | 第28页 |
| ·感受态细胞制备 | 第28-29页 |
| ·连接和转化 | 第29页 |
| ·菌落 PCR 及测序 | 第29-30页 |
| ·中华鲟 pou2 基因 RACE 扩增 | 第30-32页 |
| ·5’RACE | 第30-31页 |
| ·3’RACE | 第31-32页 |
| ·基因序列特征分析和系统进化分析 | 第32页 |
| ·中华鲟 pou2 基因的时空表达特征 | 第32-33页 |
| ·中华鲟 pou2 基因在不同组织表达分析 | 第32-33页 |
| ·中华鲟 pou2 基因胚胎发育时序表达分析 | 第33页 |
| ·pou2 基因在 1-5 龄中华鲟性腺的表达分析 | 第33页 |
| 2. 结果 | 第33-41页 |
| ·中华鲟 pou2 基因全长 cDNA 的克隆 | 第33-35页 |
| ·中华鲟 pou2 基因保守 cDNA 片段的获得 | 第33页 |
| ·RACE-PCR 扩增中华鲟 pou2 基因的 3 端和 5 端 cDNA 序列 | 第33-34页 |
| ·中华鲟 pou2 基因 cDNA 序列 | 第34-35页 |
| ·中华鲟 pou2 基因的生物信息学分析 | 第35-38页 |
| ·中华鲟 Pou2 基因的同源性分析 | 第35-37页 |
| ·中华鲟 Pou2 基因的信号肽和磷酸化位点预测 | 第37页 |
| ·脊椎动物第Ⅴ类 POU 家族基因的系统进化分析 | 第37-38页 |
| ·第Ⅴ类 POU 基因家族成员 POU 结构域的二级结构 | 第38页 |
| ·中华鲟 pou2 基因的时空表达特征分析 | 第38-41页 |
| ·中华鲟 pou2 组织的分布特征 | 第38-40页 |
| ·中华鲟 pou2 在胚胎发育过程中的表达特征 | 第40页 |
| ·中华鲟 pou2 在未成熟性腺中的表达变化 | 第40-41页 |
| 3. 讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 中华鲟 nanos1 基因 cDNA 克隆和表达分析 | 第44-58页 |
| 1. 材料和方法 | 第44-48页 |
| ·RNA 提取 | 第44页 |
| ·cDNA 模板制备 | 第44页 |
| ·中华鲟 nanos1 基因全长 cDNA 序列的克隆 | 第44-45页 |
| ·中华鲟 nanos1 基因在不同组织表达分析 | 第45页 |
| ·中华鲟 nanos1 基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第45-46页 |
| ·表达载体的构建 | 第45页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第45页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第46页 |
| ·抗体纯化 | 第46页 |
| ·Western blot 免疫印迹 | 第46-47页 |
| ·冰冻切片 | 第47页 |
| ·免疫组织荧光定位 | 第47-48页 |
| 2. 结果 | 第48-55页 |
| ·中华鲟 nanos1 基因全长 cDNA 的克隆 | 第48-50页 |
| ·中华鲟 nanos1 基因保守 cDNA 片段的获得 | 第48页 |
| ·RACE-PCR 扩增中华鲟 nanos1 基因的 3 端和 5 端 cDNA 序列 | 第48-49页 |
| ·中华鲟 nanos1 基因 cDNA 序列 | 第49-50页 |
| ·中华鲟 nanos1 基因的生物信息学分析 | 第50-52页 |
| ·中华鲟 Nanos1 基因的系统进化分析 | 第50-51页 |
| ·中华鲟 Nanos1 的同源性分析 | 第51-52页 |
| ·中华鲟 nanos1 不同组织的表达特征 | 第52页 |
| ·中华鲟 nanos1 基因的原核表达及融合蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·中华鲟 AsNanos1 多克隆抗体的特异性检测 | 第53页 |
| ·中华鲟 AsNanos1 在不同组织中的 Western blot 分析 | 第53-54页 |
| ·中华鲟 AsNanos1 蛋白在性腺中的免疫荧光定位 | 第54-55页 |
| 3. 讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 中华鲟 DAZ 家族基因 cDNA 克隆和表达分析 | 第58-80页 |
| 1. 材料和方法 | 第58-60页 |
| ·RNA 提取 | 第58页 |
| ·cDNA 模板制备 | 第58页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第58-60页 |
| ·中华鲟 DAZ 家族基因全长 cDNA 全长序列的克隆 | 第60页 |
| ·中华鲟 boule 基因不同亚型的分析 | 第60页 |
| ·中华鲟 boule 基因部分 cDNA 对应的基因组序列 | 第60页 |
| ·中华鲟 DAZ 家族基因在不同组织表达分析 | 第60页 |
| ·中华鲟 DAZ 家族基因精巢和卵巢中的表达分析 | 第60页 |
| 2. 结果 | 第60-77页 |
| ·中华鲟 DAZ 家族基因全长 cDNA 序列的克隆 | 第60-64页 |
| ·中华鲟 dazl 和 boule1 基因保守 cDNA 片段的获得 | 第60-61页 |
| ·RACE-PCR 扩增中华鲟 dazl 和 boule1 基因的 3 端和 5 端 cDNA 序 | 第61-64页 |
| ·中华鲟 dazl 和 boule1 基因 cDNA 序列 | 第64页 |
| ·中华鲟 DAZ 家族基因的生物信息学分析 | 第64-67页 |
| ·DAZ 家族基因 RRM 结构域的比对分析 | 第64页 |
| ·中华鲟 AsDazl 和 AsBoule 氨基酸序列的同源性分析 | 第64-67页 |
| ·DAZ 家族基因系统进化分析 | 第67页 |
| ·中华鲟 DAZ 家族基因在不同组织的表达分析 | 第67页 |
| ·中华鲟 DAZ 家族基因在精巢和卵巢中的表达分析 | 第67-69页 |
| ·中华鲟 boule 基因至少存在着两个拷贝 | 第69页 |
| ·中华鲟 boule 基因 cDNA 序列的不同亚型分析 | 第69-76页 |
| ·中华鲟 boule 基因的选择性剪切 | 第76-77页 |
| 3. 讨论 | 第77-80页 |
| 参考文献 | 第80-92页 |
| 硕士期间发表或待发表论 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
