| 符号说明 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1.前言 | 第12-22页 |
| ·植物维生素 E 基因工程研究进展 | 第13-16页 |
| ·天然维生素 E 的分类与活性 | 第13-14页 |
| ·天然维生素 E 的生物合成 | 第14页 |
| ·植物维生素 E 基因工程研究进展 | 第14-16页 |
| ·花生栽培种的起源进化研究 | 第16-18页 |
| ·花生栽培种的的野生近缘种 | 第16-17页 |
| ·花生栽培种的二倍体野生亲本研究 | 第17-18页 |
| ·花生遗传转化研究进展 | 第18-20页 |
| ·花生高效再生体系研究进展 | 第18-19页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化研究 | 第19-20页 |
| ·用于花生遗传转化的外源基因 | 第20页 |
| ·本研究的目的意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·花生 HPPD 和γ-TMT 的克隆 | 第22-29页 |
| ·试验材料 | 第22-23页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·试验方法 | 第23-29页 |
| ·花生 HPPD 和γ-TMT 的电子克隆及引物设计 | 第23页 |
| ·花生幼果总 RNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·总 RNA 的检测 | 第24页 |
| ·RNA 的逆转录 | 第24-25页 |
| ·目的基因γ-TMT 的 RT-PCR | 第25页 |
| ·花生基因组 DNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·HPPD 和γ-TMT 的 DNA 扩增 | 第26页 |
| ·目的基因的胶回收 | 第26-27页 |
| ·克隆载体 pEASY-T1 的连接 | 第27页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第27-28页 |
| ·阳性重组子鉴定及测序 | 第28页 |
| ·序列分析 | 第28-29页 |
| ·花生γ-TMT 植物表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·试验材料 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-30页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·限制性双酶切： | 第30页 |
| ·载体连接 | 第30页 |
| ·转化大肠杆菌方法 | 第30页 |
| ·重组子鉴定 | 第30页 |
| ·拟南芥γ-TMT 对花生的遗传转化 | 第30-34页 |
| ·试验材料 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-34页 |
| ·遗传转化方法 | 第31-32页 |
| ·转基因花生的鉴定 | 第32-33页 |
| ·转基因苗移栽 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-53页 |
| ·花生 HPPD 和γ-TMT 的电子克隆 | 第34-36页 |
| ·花生总 RNA 的提取及逆转录 | 第36-37页 |
| ·花生 HPPD 和γ-TMT 的克隆 | 第37-38页 |
| ·花生 HPPD 和γ-TMT 的序列分析 | 第38-50页 |
| ·花生 HPPD 的序列分析 | 第38-45页 |
| ·DNA 序列分析 | 第38-42页 |
| ·AhHPPD 编码的氨基酸序列分析 | 第42-44页 |
| ·氨基酸序列比对与系统进化分析 | 第44-45页 |
| ·花生γ-TMT 的序列分析 | 第45-50页 |
| ·花生栽培种与野生种中 AhgTMT 及其推测的氨基酸序列比对 | 第45-47页 |
| ·AhTMT 的氨基酸序列分析 | 第47-50页 |
| ·花生γ-TMT 表达载体的构建 | 第50页 |
| ·拟南芥γ-TMT 对花生的转化 | 第50-53页 |
| ·γ-TMT 基因的花生转化及 PPT 抗性植株的获得 | 第50页 |
| ·转基因苗大田移栽及成活植株的性状调查 | 第50-51页 |
| ·抗性苗的 PCR 检测 | 第51-53页 |
| ·γ-TMT 基因的检测 | 第51-52页 |
| ·bar 基因的检测 | 第52-53页 |
| 4.讨论 | 第53-56页 |
| ·基于 EST 序列的电子克隆策略 | 第53页 |
| ·利用 HPPD 提高花生维生素 E 含量的探讨 | 第53-54页 |
| ·利用γ-TMT 提高花生中α-生育酚含量的研究 | 第54页 |
| ·花生栽培种两条 gHPPD 序列的来源推测 | 第54-55页 |
| ·花生栽培种起源的分析 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录 1：主要化学试剂及缓冲液配制 | 第65-66页 |
| 附录 2：常用培养基配方 | 第66-68页 |
| 附录 3 表达载体构建流程 | 第68-69页 |
| 图版 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第71页 |
