| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 縮略表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-20页 |
| 1 百草枯概述 | 第13-15页 |
| ·百草枯中毒 | 第13-14页 |
| ·百草枯治疗 | 第14-15页 |
| 2 噬菌体展示 | 第15-18页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第15-16页 |
| ·基因工程抗体发现历史 | 第16-17页 |
| ·噬菌体抗体库筛选方法 | 第17-18页 |
| ·噬菌体抗体库筛查方法 | 第18页 |
| 3 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 4 研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 T7噬菌体外壳蛋白10A的表达、纯化及多抗制备 | 第20-27页 |
| 1 材料与方法 | 第20-22页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第20-21页 |
| ·主要溶液的配制 | 第21-22页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液的配制 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·ELISA相关溶液的配制 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-24页 |
| ·噬菌体外壳蛋白10A的诱导表达 | 第22-23页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第23页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第23页 |
| ·抗体的纯化 | 第23页 |
| ·ELISA检测 | 第23页 |
| ·Western blot分析 | 第23-24页 |
| ·纯化多抗针对大肠杆菌BLT5615的结合 | 第24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-26页 |
| ·噬菌体外壳蛋白10A的诱导表达与纯化 | 第24-25页 |
| ·抗血清的效价测定结果 | 第25页 |
| ·Western blot鉴定 | 第25页 |
| ·10A蛋白多抗在噬菌体展示筛查ELISA实验中浓度的确定 | 第25-26页 |
| 4. 讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 噬菌体全人源抗体库的构建 | 第27-38页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第28页 |
| ·主要溶液的配制 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-35页 |
| ·引物设计与合成 | 第28-30页 |
| ·克隆重链V_H的引物设计 | 第29页 |
| ·克隆V_K轻链的引物设计 | 第29-30页 |
| ·克隆轻链V_λ片断的引物设计 | 第30页 |
| ·人外周血淋巴细胞的分离 | 第30页 |
| ·总细胞RNA的提取(Trizol法) | 第30-31页 |
| ·cDNA的合成 | 第31页 |
| ·全套抗体基因的克隆 | 第31-33页 |
| ·抗体可变区反应体系 | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳紫外灯下回收PCR产物 | 第32页 |
| ·V_H与V_L的拼接 | 第32-33页 |
| ·T7噬菌体展示scFv初级库的构建 | 第33-35页 |
| ·scFv片段的酶切 | 第33页 |
| ·scFv片段与T7Select(?)10-3载体连接 | 第33-34页 |
| ·重组T7噬菌体载体的体外包装 | 第34页 |
| ·重组T7噬菌体滴度测定 | 第34页 |
| ·重组噬菌体的扩增 | 第34-35页 |
| ·初级库的PCR鉴定及测序 | 第35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-37页 |
| ·RNA提取 | 第35页 |
| ·全套抗体重链、轻链的克隆 | 第35-36页 |
| ·初级抗体库的滴度 | 第36页 |
| ·初级抗体库的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| 4 结论 | 第37-38页 |
| 第四章 抗百草枯单链抗体的筛选与表达 | 第38-48页 |
| 1 材料与方法 | 第38-40页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第39页 |
| ·主要溶液的配制 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液的配制 | 第39-40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·ELISA相关溶液的配制 | 第40页 |
| 2 噬菌体抗体库的交替筛选 | 第40-44页 |
| ·磁珠筛选 | 第41-42页 |
| ·氨基化磁珠与羧基化百草枯的偶联与鉴定 | 第41页 |
| ·磁珠法筛选 | 第41-42页 |
| ·固相筛选 | 第42页 |
| ·鉴定噬菌体抗体 | 第42-43页 |
| ·ELISA鉴定噬菌体抗体 | 第42-43页 |
| ·竞争ELISA鉴定 | 第43页 |
| ·特异scFv抗体的表达 | 第43页 |
| ·间接竞争ELISA测定表达后的scFv抗体特异性 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-47页 |
| ·磁珠偶联的鉴定 | 第44页 |
| ·筛选结果 | 第44-45页 |
| ·噬菌体抗体的鉴定 | 第45页 |
| ·scFv的表达 | 第45-47页 |
| 4 结果与讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 全文总结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 在读硕士期间发表文章 | 第53页 |
