目录 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-11页 |
符号说明 | 第11-13页 |
第一章 前言 | 第13-21页 |
一、昆虫蜕皮变态的分子机制 | 第13-17页 |
1. 昆虫生长发育的激素调控 | 第13-14页 |
2. 蜕皮激素调控的级联反应 | 第14-16页 |
·蜕皮激素核受体 | 第14-15页 |
·蜕皮激素信号通路中的级联反应基因 | 第15-16页 |
·激素接受子3(Hormone Receptor 3,HR3) | 第15页 |
·E75 | 第15-16页 |
·Broad | 第16页 |
3. 保幼激素信号途径 | 第16-17页 |
·Methoprene-tolerant(Met) | 第16-17页 |
·USP | 第17页 |
·Broad | 第17页 |
·Krupple homolog 1(Kr-hl) | 第17页 |
二、腺苷酸激酶在生物体生长和发育中的功能研究 | 第17-20页 |
1. AK的分类和功能 | 第18-20页 |
·细胞质中AK的研究 | 第18-19页 |
·线粒体中AK的研究 | 第19-20页 |
·细胞核中AK的研究 | 第20页 |
三、存在的科学问题及研究意义 | 第20-21页 |
第二章 腺苷酸激酶2(AK2)在棉铃虫生长发育中的功能 | 第21-43页 |
一. 引言 | 第21-22页 |
二. 材料和方法 | 第22-43页 |
1. 材料 | 第22-23页 |
·实验动物 | 第22页 |
·试剂与仪器 | 第22-23页 |
2. 方法 | 第23-31页 |
·AK2基因序列分析 | 第23页 |
·原核重组表达和多克隆抗体制备 | 第23-27页 |
·重组质粒AK2-pET-30a的构建 | 第23-24页 |
·重组质粒AK2-pET-30a转化大肠杆菌DH5α | 第24-25页 |
·重组质粒AK2-pET-30a转化Rosette(DE3) | 第25页 |
·试表达 | 第25页 |
·大规模表达及重组蛋白的纯化 | 第25-26页 |
·多克隆抗体的制备 | 第26-27页 |
·免疫印迹技术 | 第27页 |
·免疫细胞化学 | 第27-28页 |
·虫体RNAi | 第28-31页 |
·AK2-L4400-HT115(DE3)饲喂干扰菌株的构建 | 第28页 |
·dsAK2的试表达 | 第28-29页 |
·dsAK2的诱导表达 | 第28-29页 |
·菌体RNA的提取 | 第29页 |
·虫体饲喂dsAK2 | 第29页 |
·虫体生测统计 | 第29页 |
·血球计数板法 | 第29-30页 |
·虫体RNA提取 | 第30页 |
·cDNA第一链合成 | 第30页 |
·RT-PCR检测 | 第30-31页 |
·细胞MTT实验 | 第31页 |
3. 结果 | 第31-41页 |
·AK2在不同物种中高度保守 | 第31-35页 |
·AK2在棉铃虫生长发育各组织中持家表达 | 第35页 |
·AK2定位于线粒体 | 第35-37页 |
·AK2促进细胞的增殖 | 第37-38页 |
·干扰AK2引起虫体生长缺陷 | 第38-39页 |
·干扰AK2抑制基因的转录 | 第39-40页 |
·干扰AK2抑制昆虫血细胞的增殖 | 第40-41页 |
4. 讨论 | 第41-43页 |
参考文献 | 第43-51页 |
论文创新点总结 | 第51-52页 |
致谢 | 第52-53页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第53页 |