| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 中英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 材料与方法 | 第16-47页 |
| 1 实验材料 | 第16-23页 |
| ·实验动物 | 第16页 |
| ·菌株和细胞株 | 第16页 |
| ·质粒载体 | 第16-18页 |
| ·试剂盒 | 第18页 |
| ·工具酶及分子量标准 | 第18页 |
| ·引物序列 | 第18-19页 |
| ·放射性同位素 | 第19页 |
| ·试剂(按试剂公司分类) | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-22页 |
| ·分析软件 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-47页 |
| ·细胞学实验 | 第23-26页 |
| ·DNA、RNA及蛋白的提取、目的基因的扩增 | 第26-29页 |
| ·重组质粒的操作方法 | 第29-34页 |
| ·MIRNA的PAGE/NORTHERN BLOTTING 印迹杂交 | 第34-36页 |
| ·WESTERN印迹 | 第36-40页 |
| ·免疫荧光染色 | 第40-41页 |
| ·REAL-TIME PCR实验 | 第41-42页 |
| ·MIRNA芯片 | 第42-43页 |
| ·细胞生长情况检测 | 第43页 |
| ·流式细胞术检测 | 第43-44页 |
| ·PI法检测细胞周期 | 第43-44页 |
| ·ANNEXINV与PI双染法检测细胞凋亡 | 第44页 |
| ·软琼脂克隆形成实验 | 第44-45页 |
| ·细胞迁移、体外侵袭能力检测 | 第45-46页 |
| ·统计学方法 | 第46-47页 |
| 技术路线 | 第47-48页 |
| 结果 | 第48-76页 |
| 1 胰腺癌病例的临床病理资料 | 第48-49页 |
| 2 胰腺癌组织的显微切割 | 第49页 |
| 3 总RNA的提取 | 第49-51页 |
| 4 MIRNA芯片的结果 | 第51-57页 |
| ·芯片杂交的扫描图像 | 第51-53页 |
| ·MIRNA芯片杂交的差异基因 | 第53-57页 |
| 5 NORTHERN BLOTTING验证的结果 | 第57-59页 |
| 6 各个细胞系的K-RAS MRNA、蛋白和LET-7的比较 | 第59-60页 |
| 7 MIR-96前体序列的多态性 | 第60-61页 |
| 8 构建表达MIR-96的载体 | 第61-63页 |
| 9 载体表达有效性的验证 | 第63-65页 |
| 10 稳定转染细胞系的建立 | 第65页 |
| 11 细胞生物学行为检测 | 第65-70页 |
| ·细胞增殖 | 第65-66页 |
| ·无血清培养基中细胞的生长能力 | 第66-67页 |
| ·细胞周期 | 第67-68页 |
| ·细胞凋亡相关的ANNEXIN V检测 | 第68页 |
| ·软琼脂生长集落检测 | 第68-69页 |
| ·细胞聚集实验 | 第69页 |
| ·细胞划痕实验 | 第69-70页 |
| ·细胞的侵袭能力检测 | 第70页 |
| 12 MIR-96的表达抑制RAS通路中几个主要信号分子的表达 | 第70-71页 |
| 13 MIR-96调节的靶基因验证 | 第71-76页 |
| 讨论 | 第76-86页 |
| 1 MIRNA差异表达与胰腺癌 | 第77-80页 |
| 2 MIR-96在人胰腺癌组织中的表达鉴定和初步功能分析 | 第80-81页 |
| 3 MIR-96靶基因寻找 | 第81-83页 |
| 4 展望 | 第83-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 小结 | 第94-95页 |
| 综述 | 第95-110页 |
| 参考文献 | 第106-110页 |
| 攻读博士期间发表和待发的表文章 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
