| 第1章 文献综述 | 第1-23页 |
| ·头孢菌素与顶头孢霉概述 | 第11-14页 |
| ·氧气在发酵过程中的重要作用 | 第14-15页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因(vgb)及其研究进展 | 第15-21页 |
| ·透明颤菌概述 | 第15页 |
| ·透明颤菌血红蛋白及其基因的早期研究 | 第15-16页 |
| ·VHb结构 | 第16-17页 |
| ·vgb基因的组成及其特点 | 第17-18页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的作用机制和功能的研究 | 第18-19页 |
| ·vgb基因的克隆及其表达调控的机制 | 第19-20页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因的应用 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-40页 |
| ·实验材料 | 第23-27页 |
| ·菌种与质粒 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·抗生素 | 第24页 |
| ·主要用酶 | 第24页 |
| ·Marker | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·溶液与试剂 | 第25-27页 |
| ·实验方法 | 第27-40页 |
| ·重组质粒pMK_4-LV的构建 | 第27-30页 |
| ·重组质粒pMK_4-LV转化大肠杆菌DH5α | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌重组子的筛选与鉴定 | 第31页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因在大肠杆菌DH5α中的表达 | 第31-33页 |
| ·顶头孢霉原生质体的制备与再生 | 第33页 |
| ·氯霉素对顶头孢霉原生质体再生的影响 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pMK_4-LV对顶头孢霉原生质体的转化 | 第34页 |
| ·顶头孢霉重组子的筛选鉴定 | 第34-36页 |
| ·顶头孢霉重组子的诱导表达和检测 | 第36-37页 |
| ·重组子生产性能的考察-VHb的诱导表达对菌体生长的影响 | 第37-38页 |
| ·顶头孢霉重组子摇瓶发酵试验-VHb的诱导表达对发酵效价的影响 | 第38-40页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第40-65页 |
| ·质粒pMK_4-LV的构建 | 第40-43页 |
| ·构建方法 | 第40-43页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因在大肠杆菌DH5α中的表达 | 第43-45页 |
| ·vgb基因的表达对菌体生长的影响 | 第43页 |
| ·重组子表达VHb的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第43-44页 |
| ·CO差光谱法测定诱导表达的VHb活性 | 第44-45页 |
| ·顶头孢霉原生质体制备及再生条件的建立 | 第45-50页 |
| ·菌龄对原主质体形成的影响 | 第45页 |
| ·培养基对原生质体形成和再生的影响 | 第45-46页 |
| ·酶对原生质体形成的影响 | 第46-47页 |
| ·酶解时间对原生质体形成和再生的影响 | 第47页 |
| ·渗透压稳定剂对原生质体形成的影响 | 第47-48页 |
| ·渗透压稳定剂对原生质体再生的影响 | 第48-49页 |
| ·培养方式对原生质体再生的影响 | 第49页 |
| ·氯霉素对顶头孢霉原生质体再生的影响 | 第49-50页 |
| ·顶头孢霉原生质体转化体系的建立 | 第50-54页 |
| ·PEG聚乙二醇介导的顶头孢霉原生质体转化 | 第50页 |
| ·顶头孢霉原生质体电击转化 | 第50-54页 |
| ·顶头孢霉转化子的筛选-最佳扩增条件的确定 | 第54-57页 |
| ·顶头孢霉基因组提取 | 第54-55页 |
| ·最佳扩增条件 | 第55-56页 |
| ·顶头孢霉重组子PCR扩增结果 | 第56-57页 |
| ·重组子表达VHb的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第57页 |
| ·CO差光谱法测定顶头孢霉重组子中VHb的活性 | 第57-59页 |
| ·超声破碎-二苯胺显色测定菌体量方法的建立 | 第59-61页 |
| ·菌体细胞破碎最佳条件的确定 | 第59-60页 |
| ·菌丝量标准曲线的绘制 | 第60-61页 |
| ·跟踪测定顶头孢霉发酵过程的菌丝量 | 第61页 |
| ·顶头孢霉重组子摇瓶发酵菌体生长情况测定结果 | 第61-63页 |
| ·顶头孢霉重组子摇瓶发酵效价变化情况 | 第63-65页 |
| 第4章 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 硕士研究生在读期间发表的论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
