| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-24页 |
| ·绿色荧光蛋白及其应用的研究进展 | 第11-21页 |
| ·GFP的结构 | 第12-13页 |
| ·GFP的发光特性和生色基团 | 第13-15页 |
| ·GFP的发光特性 | 第13-14页 |
| ·GFP的生色基团 | 第14-15页 |
| ·突变型GFP的发光机制 | 第15-16页 |
| ·Ⅰ型突变 | 第15页 |
| ·Ⅱ型突变 | 第15-16页 |
| ·Ⅲ型突变 | 第16页 |
| ·GFP的应用及前景展望 | 第16-20页 |
| ·GFP作为遗传标记的优点 | 第16-18页 |
| ·GFP作为报告分子 | 第18-19页 |
| ·GFP作为融合标记物 | 第19页 |
| ·GFP的四级结构 | 第19-20页 |
| ·增强型绿色荧光蛋白(EGFP) | 第20-21页 |
| ·前列腺癌疾病研究进展及基因PCaO5 | 第21-23页 |
| ·本实验研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 第2章 材料和方法 | 第24-39页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·菌种与质粒 | 第24页 |
| ·细胞系 | 第24-25页 |
| ·酶类及试剂(盒) | 第25页 |
| ·主要溶液及培养基或培养液 | 第25-27页 |
| ·主要实验仪器 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-39页 |
| ·LNCaP细胞的传代、冻存和复苏 | 第28页 |
| ·培养细胞总RNA提取 | 第28-29页 |
| ·提取的LNCaP RNA反转成cDNA | 第29页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第29-30页 |
| ·DNA胶回收试剂盒回收PCR产物 | 第30-31页 |
| ·胶回收产物及载体的双酶切 | 第31页 |
| ·酶切产物的胶回收 | 第31页 |
| ·目的基因片段与载体连接 | 第31-32页 |
| ·制备感受态大肠杆菌DH5α | 第32页 |
| ·重组载体转化感受态大肠杆菌DH5α | 第32页 |
| ·阳性菌落扩增后测序鉴定 | 第32页 |
| ·质粒提取 | 第32-34页 |
| ·提取质粒的双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·LNCaP细胞的转染 | 第34-35页 |
| ·Northern blot初步检测融合基因的表达 | 第35-37页 |
| ·观察 | 第37页 |
| ·生物信息学方法预测PCaO5的可能功能 | 第37-39页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第39-46页 |
| ·LNCaP细胞的培养 | 第39页 |
| ·LNCaP细胞总RNA的提取及质量的检测 | 第39页 |
| ·PCaO5基因目的片段的扩增 | 第39-40页 |
| ·表达载体图谱 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白表达载体的双酶切 | 第41页 |
| ·序列分析 | 第41-42页 |
| ·CaCl_2介导重组质粒转化感受态DH5α | 第42页 |
| ·前列腺癌细胞LNCaP的转染条件的优化 | 第42-43页 |
| ·Northern blot检测 | 第43-44页 |
| ·转染LNCaP细胞观察 | 第44-45页 |
| ·生物信息学方法预测PCaO5可能的功能 | 第45-46页 |
| 第4章 讨论 | 第46-52页 |
| ·EGFP型表达载体的选择 | 第46-48页 |
| ·GFP的优势 | 第46页 |
| ·改造型GFP(EGFP) | 第46-47页 |
| ·构建增强型绿色荧光蛋白真核报告表达载体 | 第47-48页 |
| ·蛋白产物的亚细胞定位 | 第48页 |
| ·脂质体转染 | 第48-50页 |
| ·培养基中的血清及脂质体的选择 | 第48-49页 |
| ·细胞的活性 | 第49页 |
| ·细胞的铺板密度 | 第49页 |
| ·DNA纯度 | 第49-50页 |
| ·阳离子脂质体和DNA的最佳量 | 第50页 |
| ·瞬时和稳定表达 | 第50页 |
| ·载体细胞的选择 | 第50-51页 |
| ·pEGFP-C1-PCaO5融合蛋白的亚细胞定位与PCaO5蛋白的亚细胞定位 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |