| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 一、 前言 | 第8-20页 |
| 1 橡胶产胶、排胶生理 | 第8-9页 |
| 1．1 产胶生理 | 第8-9页 |
| 1．2 排胶生理 | 第9页 |
| 2 橡胶树死皮研究 | 第9-12页 |
| 3 差异表达基因（片段）的分离 | 第12-16页 |
| 3．1 示差筛选和扣除杂交 | 第12-13页 |
| 3．2 mRNA差异显示技术 | 第13页 |
| 3．3 RNA指纹技术 | 第13-14页 |
| 3．4 代表性差示分析 | 第14页 |
| 3．5 抑制性扣除杂交 | 第14-15页 |
| 3．6 基因表达系列分析 | 第15-16页 |
| 4 全长cDNA的克隆策略 | 第16-20页 |
| 4．1 筛选cDNA文库 | 第16-17页 |
| 4．2 RACE | 第17-18页 |
| 4．2．1 3’RACE | 第17页 |
| 4．2．2 5’RACE | 第17-18页 |
| 4．3 “步移”方法 | 第18页 |
| 4．4 计算机杂交 | 第18-20页 |
| 二、 材料与方法 | 第20-38页 |
| 1． 材料 | 第20页 |
| 1．1 试验材料 | 第20页 |
| 1．2 菌种及质粒 | 第20页 |
| 1．3 试剂 | 第20页 |
| 2． 方法 | 第20-38页 |
| 2．1 5’RACE扩增HbfcDNA的5’端 | 第20-29页 |
| 2．1．1 橡胶胶乳总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2．1．2 mRNA的纯化 | 第21页 |
| 2．1．3 用于5’RACE的cDNA第一链合成 | 第21-22页 |
| 2．1．4 cDNA第一链的纯化 | 第22页 |
| 2．1．5 cDNA第一链的加尾 | 第22页 |
| 2．1．6 5’RACE PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2．1．7 PCR扩增产物的克隆及重组子筛选 | 第23-27页 |
| 2．1．8 DNA序列分析 | 第27-29页 |
| 2．2 Hbf全长cDNA的PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2．2．1 橡胶树叶片RNA的提取 | 第29页 |
| 2．2．2 引物设计 | 第29页 |
| 2．2．3 PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2．3 Hbf全长DNA的扩增 | 第30-31页 |
| 2．3．1 橡胶树叶片基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2．3．2 引物设计 | 第31页 |
| 2．3．3 PCR扩增 | 第31页 |
| 2．4 橡胶树基因组DNA的Southern杂交 | 第31-33页 |
| 2．4．1 橡胶树叶片基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 2．4．2 基因组DNA的EcoRⅠ，HindⅢ，XbaⅠ消化 | 第31页 |
| 2．4．3 DNA的印迹转移 | 第31-32页 |
| 2．4．4 探针的标记 | 第32页 |
| 2．4．5 Southern杂交 | 第32-33页 |
| 2．5 Northern杂交 | 第33-34页 |
| 2．5．1 RNA的提取 | 第33页 |
| 2．5．2 探针的标记 | 第33-34页 |
| 2．5．3 RNA的印迹转移 | 第34页 |
| 2．5．4 Northern杂交 | 第34页 |
| 2．6 启动子的分离 | 第34-36页 |
| 2．6．1 构建Genome Walker文库 | 第34-35页 |
| 2．6．2 Genome Walker DNA Walking | 第35-36页 |
| 2．7 植物表达载体pBIH的构建 | 第36-38页 |
| 2．7．1 阳性重组质粒的稍大量提取 | 第36页 |
| 2．7．2 目的片段的回收 | 第36-37页 |
| 2．7．3 质粒载体Pbi121双酶切 | 第37页 |
| 2．7．4 连接 | 第37页 |
| 2．7．5 筛选和鉴定 | 第37-38页 |
| 三、 结果与分析 | 第38-48页 |
| 1 Hbf cDNA的结构分析 | 第38-42页 |
| 1．1 5’RACE扩增 | 第38-40页 |
| 1．2 cDNA编码区的PCR扩增 | 第40页 |
| 1．3 Hbf cDNA的结构分析 | 第40-42页 |
| 2 Hbf内含子的克隆 | 第42-43页 |
| 2．1 Hbf DNA的扩增 | 第42页 |
| 2．2 Hbf DNA的结构分析 | 第42-43页 |
| 3 橡胶树基因组DNA的Southern杂交 | 第43-44页 |
| 4 Hbf基因的表达分析 | 第44-45页 |
| 4．1 Hbf基因在健康树和死皮树中的表达分析 | 第44页 |
| 4．2 Hbf基因在健康树树皮、乳管、叶片中的表达分析 | 第44-45页 |
| 4．3 Hbf基因在离死皮树割线不同部位乳管中的表达分析 | 第45页 |
| 5 Hbf基因启动子的克隆及结构分析 | 第45-47页 |
| 6 Hbf植物表达载体pBIH的构建 | 第47-48页 |
| 四、 讨论 | 第48-52页 |
| 1 Hbf的结构分析 | 第48-49页 |
| 1．1 Hbf cDNA | 第48页 |
| 1．2 内含子 | 第48-49页 |
| 1．3 5’前导序列 | 第49页 |
| 2 Hbf与橡胶树死皮确实密切相关 | 第49-50页 |
| 3 橡胶树死皮可能是一种编程性细胞死亡 | 第50-51页 |
| 4 Hbf可能是编程性细胞死亡的负调控因子 | 第51-52页 |
| 五、 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 英文摘要 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
