致谢 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
第一部分 引言与文献综述 | 第9-30页 |
1 引言 | 第9-12页 |
1.1 香蕉的分类 | 第9-10页 |
1.2 香蕉的生物学特性 | 第10页 |
1.3 香蕉的生产状况及经济意义 | 第10-11页 |
1.4 香蕉贮运过程中的保鲜 | 第11-12页 |
2 乙烯与香蕉的成熟 | 第12-19页 |
2.1 乙烯与果实的成熟 | 第12-13页 |
2.2 乙烯生物合成的研究进展 | 第13-15页 |
2.3 ACC合成酶(ACS)与ACC氧化酶(ACO)的研究进展 | 第15-17页 |
2.4 乙烯与香蕉的成熟 | 第17-19页 |
2.5 乙烯信号转导的研究进展 | 第19页 |
3 反义RNA技术及其在果实采后保鲜中的应用 | 第19-22页 |
3.1 反义RNA的发现 | 第20页 |
3.2 反义RNA的作用原理 | 第20-21页 |
3.3 反义RNA技术在果实采后保鲜中的应用 | 第21-22页 |
4 香蕉植株再生及遗传转化 | 第22-28页 |
4.1 香蕉的植株再生体系 | 第22-23页 |
4.2 香蕉的遗传转化系统 | 第23-28页 |
5 本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
6 技术路线 | 第29-30页 |
第二部分 香蕉果实成熟相关ACC合成酶基因的鉴定 | 第30-37页 |
1 材料与试剂 | 第30页 |
2 方法 | 第30-34页 |
2.1 香蕉不同组织总RNA的提取 | 第30-31页 |
2.2 Northern狭线杂交 | 第31-34页 |
2.2.1 探针的标记 | 第31-32页 |
2.2.2 RNA样品的制备 | 第32页 |
2.2.3 预杂交及杂交 | 第32-33页 |
2.2.4 洗膜及显色 | 第33-34页 |
3 结果与分析 | 第34-37页 |
3.1 香蕉不同组织总RNA的提取 | 第34页 |
3.2 Northern狭线杂交 | 第34页 |
3.3 同源性比较 | 第34-37页 |
第三部分 ACC合成酶反义基因植物表达载体的构建 | 第37-46页 |
1 材料与试剂 | 第39-40页 |
2 方法 | 第40-44页 |
2.1 ACC合成酶完整基因的拼接 | 第40-44页 |
2.1.1 重组质粒pBS-667的获得 | 第40-43页 |
2.1.2 重组质粒pBS-ACC的获得 | 第43-44页 |
2.2 反义基因载体的构建 | 第44页 |
3 结果与分析 | 第44-46页 |
3.1 ACC合成酶完整基因的拼接 | 第44-45页 |
3.2 反义基因载体的构建 | 第45-46页 |
第四部分 香蕉高效再生体系的建立 | 第46-50页 |
1 材料与试剂 | 第46页 |
2 方法 | 第46-48页 |
2.1 芽增殖途径 | 第46页 |
2.2 器官发生途径 | 第46-47页 |
2.3 体细胞胚发生途径 | 第47-48页 |
3 结果与分析 | 第48-50页 |
3.1 芽增殖途径 | 第48页 |
3.2 器官发生途径 | 第48-49页 |
3.3 体细胞胚发生途径 | 第49-50页 |
第五部分 香蕉的遗传转化 | 第50-63页 |
1 材料与试剂 | 第50页 |
2 香蕉材料的准备及抗性梯度实验 | 第50页 |
2.1 香蕉材料的准备 | 第50页 |
2.2 抗性梯度实验 | 第50页 |
3 质粒pBBB-aACC导入农杆菌EHA105 | 第50-52页 |
3.1 三亲交配法将反义载体pBBB-aACC导入农杆菌EHA105 | 第50-51页 |
3.2 菌落原位杂交筛选重组子 | 第51-52页 |
4 农杆菌介导法转化香蕉芽顶端分生组织及球茎薄片 | 第52-53页 |
4.1 无菌受体材料的准备 | 第52页 |
4.2 农杆菌的培养 | 第52页 |
4.3 侵染 | 第52-53页 |
4.4 共培养 | 第53页 |
4.5 选择培养 | 第53页 |
4.6 生根培养 | 第53页 |
5 基因枪法转化香蕉顶端分生组织 | 第53-56页 |
5.1 反义表达载体pBBB-aACC的大量提取及纯化 | 第53-55页 |
5.2 微弹载体的制备 | 第55页 |
5.3 受体材料的准备 | 第55页 |
5.4 装弹 | 第55页 |
5.5 轰击 | 第55-56页 |
5.6 过渡培养 | 第56页 |
5.7 筛选培养 | 第56页 |
6 抗性植株的PCR检测 | 第56-58页 |
6.1 CTAB法提取香蕉基因组DNA | 第56-57页 |
6.2 PCR扩增 | 第57-58页 |
6.3 PCR产物的凝胶电泳 | 第58页 |
7 结果与分析: | 第58-63页 |
7.1 香蕉材料的抗性梯度实验 | 第58页 |
7.2 pBBB-aACC导入农杆菌 | 第58-59页 |
7.2.1 三亲交配法将反义载体导入农杆菌EHA105 | 第58-59页 |
7.2.2 菌落原位杂交筛选重组子 | 第59页 |
7.3 农杆菌介导法转化香蕉芽顶端分生组织及球茎薄片 | 第59-60页 |
7.4 基因枪法转化香蕉芽顶端分生组织及球茎薄片 | 第60-61页 |
7.5 抗性植株的PCR检测 | 第61-63页 |
第六部分 结论 | 第63-64页 |
第七部分 讨论 | 第64-67页 |
参考文献 | 第67-73页 |
缩写词 | 第73-74页 |
英文摘要 | 第74-75页 |