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香蕉1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(ACS)反义基因植物表达载体的构建及转化香蕉的研究

致谢第1-7页
中文摘要第7-9页
第一部分 引言与文献综述第9-30页
 1 引言第9-12页
  1.1 香蕉的分类第9-10页
  1.2 香蕉的生物学特性第10页
  1.3 香蕉的生产状况及经济意义第10-11页
  1.4 香蕉贮运过程中的保鲜第11-12页
 2 乙烯与香蕉的成熟第12-19页
  2.1 乙烯与果实的成熟第12-13页
  2.2 乙烯生物合成的研究进展第13-15页
  2.3 ACC合成酶(ACS)与ACC氧化酶(ACO)的研究进展第15-17页
  2.4 乙烯与香蕉的成熟第17-19页
  2.5 乙烯信号转导的研究进展第19页
 3 反义RNA技术及其在果实采后保鲜中的应用第19-22页
  3.1 反义RNA的发现第20页
  3.2 反义RNA的作用原理第20-21页
  3.3 反义RNA技术在果实采后保鲜中的应用第21-22页
 4 香蕉植株再生及遗传转化第22-28页
  4.1 香蕉的植株再生体系第22-23页
  4.2 香蕉的遗传转化系统第23-28页
 5 本研究的目的和意义第28-29页
 6 技术路线第29-30页
第二部分 香蕉果实成熟相关ACC合成酶基因的鉴定第30-37页
 1 材料与试剂第30页
 2 方法第30-34页
  2.1 香蕉不同组织总RNA的提取第30-31页
  2.2 Northern狭线杂交第31-34页
   2.2.1 探针的标记第31-32页
   2.2.2 RNA样品的制备第32页
   2.2.3 预杂交及杂交第32-33页
   2.2.4 洗膜及显色第33-34页
 3 结果与分析第34-37页
  3.1 香蕉不同组织总RNA的提取第34页
  3.2 Northern狭线杂交第34页
  3.3 同源性比较第34-37页
第三部分 ACC合成酶反义基因植物表达载体的构建第37-46页
 1 材料与试剂第39-40页
 2 方法第40-44页
  2.1 ACC合成酶完整基因的拼接第40-44页
   2.1.1 重组质粒pBS-667的获得第40-43页
   2.1.2 重组质粒pBS-ACC的获得第43-44页
  2.2 反义基因载体的构建第44页
 3 结果与分析第44-46页
  3.1 ACC合成酶完整基因的拼接第44-45页
  3.2 反义基因载体的构建第45-46页
第四部分 香蕉高效再生体系的建立第46-50页
 1 材料与试剂第46页
 2 方法第46-48页
  2.1 芽增殖途径第46页
  2.2 器官发生途径第46-47页
  2.3 体细胞胚发生途径第47-48页
 3 结果与分析第48-50页
  3.1 芽增殖途径第48页
  3.2 器官发生途径第48-49页
  3.3 体细胞胚发生途径第49-50页
第五部分 香蕉的遗传转化第50-63页
 1 材料与试剂第50页
 2 香蕉材料的准备及抗性梯度实验第50页
  2.1 香蕉材料的准备第50页
  2.2 抗性梯度实验第50页
 3 质粒pBBB-aACC导入农杆菌EHA105第50-52页
  3.1 三亲交配法将反义载体pBBB-aACC导入农杆菌EHA105第50-51页
  3.2 菌落原位杂交筛选重组子第51-52页
 4 农杆菌介导法转化香蕉芽顶端分生组织及球茎薄片第52-53页
  4.1 无菌受体材料的准备第52页
  4.2 农杆菌的培养第52页
  4.3 侵染第52-53页
  4.4 共培养第53页
  4.5 选择培养第53页
  4.6 生根培养第53页
 5 基因枪法转化香蕉顶端分生组织第53-56页
  5.1 反义表达载体pBBB-aACC的大量提取及纯化第53-55页
  5.2 微弹载体的制备第55页
  5.3 受体材料的准备第55页
  5.4 装弹第55页
  5.5 轰击第55-56页
  5.6 过渡培养第56页
  5.7 筛选培养第56页
 6 抗性植株的PCR检测第56-58页
  6.1 CTAB法提取香蕉基因组DNA第56-57页
  6.2 PCR扩增第57-58页
  6.3 PCR产物的凝胶电泳第58页
 7 结果与分析:第58-63页
  7.1 香蕉材料的抗性梯度实验第58页
  7.2 pBBB-aACC导入农杆菌第58-59页
   7.2.1 三亲交配法将反义载体导入农杆菌EHA105第58-59页
   7.2.2 菌落原位杂交筛选重组子第59页
  7.3 农杆菌介导法转化香蕉芽顶端分生组织及球茎薄片第59-60页
  7.4 基因枪法转化香蕉芽顶端分生组织及球茎薄片第60-61页
  7.5 抗性植株的PCR检测第61-63页
第六部分 结论第63-64页
第七部分 讨论第64-67页
参考文献第67-73页
缩写词第73-74页
英文摘要第74-75页

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