| 摘要 | 第1-3页 |
| SUMMARY | 第3-8页 |
| 第一章 引言 | 第8-29页 |
| ·志贺菌及其耐药性 | 第8-12页 |
| ·大肠杆菌多药外输泵 AcrAB-TolC 的研究进展 | 第12-15页 |
| ·蛋白质分离纯化 | 第15-17页 |
| ·蛋白结晶 | 第17-23页 |
| ·本研究的意义、内容及技术路线 | 第23-29页 |
| 第二章 福氏志贺菌多药外输基因MARA、ACRA 和ACRB 的克隆与序列分析 | 第29-39页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·菌种和质粒 | 第29页 |
| ·酶和试剂 | 第29页 |
| ·仪器与设备 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-36页 |
| ·福氏志贺菌基因组DNA 的提取 | 第30页 |
| ·目的片段的扩增与回收 | 第30-33页 |
| ·目的基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第34-36页 |
| ·结果 | 第36-37页 |
| ·PCR 产物的电泳结果 | 第36页 |
| ·重组质粒pMD18-T-marA、pMD18-T-acrA 和pMD18-T-acrB 的PCR 和酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·marA、acrA 和acrB 同源性分析 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第三章 福氏志贺菌MARA、ACRA 和ACRB 基因在大肠杆菌中的表达 | 第39-50页 |
| ·材料 | 第39-41页 |
| ·重组质粒、宿主菌株 | 第39页 |
| ·试剂、工具酶及试剂盒 | 第39页 |
| ·仪器与设备 | 第39页 |
| ·主要试剂的配制 | 第39-41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| ·引物设计 | 第41-42页 |
| ·目的片段的扩增 | 第42-43页 |
| ·目的片段与pET-30a 载体的酶切回收 | 第43页 |
| ·目的片段与载体的连接转化 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pET-marA、pET-acrA 和pET-acrB 的提取与鉴定 | 第44页 |
| ·重组质粒pET-marA、pET-acrA 和pET-acrB 的重新转化 | 第44页 |
| ·重组质粒pET-marA、pET-acrA 和pET-acrB 的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·表达产物的检测 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-48页 |
| ·重组表达载体的构建和鉴定 | 第46页 |
| ·表达产物的检测 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第48页 |
| ·pET 融合表达载体的选择 | 第48-49页 |
| ·诱导表达 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第四章 重组蛋白纯化和结晶的初步研究 | 第50-62页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·重组表达菌 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-56页 |
| ·pET-acrA 和pET-marA 表达菌的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·表达产物的可溶性分析 | 第51页 |
| ·包涵体的洗涤与溶解 | 第51页 |
| ·MarA 蛋白变性液的复性 | 第51页 |
| ·acrA 和marA 的纯化及浓缩 | 第51-52页 |
| ·蛋白结晶条件的筛选 | 第52-56页 |
| ·结果 | 第56-58页 |
| ·可溶性分析 | 第56页 |
| ·包涵体的变性与复性 | 第56-57页 |
| ·蛋白纯化 | 第57页 |
| ·蛋白结晶 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| ·包涵体的变性、复性 | 第58-60页 |
| ·蛋白纯化 | 第60页 |
| ·蛋白质溶液的浓缩方法 | 第60页 |
| ·蛋白结晶 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第五章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66-67页 |
| 导师简介 | 第67-68页 |
