| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第8-12页 |
| 引言 | 第12-16页 |
| 材料与方法 | 第16-33页 |
| 1. 材料 | 第16-19页 |
| ·主要试剂 | 第16-18页 |
| ·cDNA 克隆及载体构建试剂 | 第16-17页 |
| ·蛋白分析试剂 | 第17页 |
| ·酶活性分析试剂 | 第17页 |
| ·高效液相色谱及荧光光谱扫描试剂 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| 2. 方法 | 第19-33页 |
| ·Rabbit-NRDR 重组蛋白表达载体的构建 | 第19-24页 |
| ·Gateway Technology 基因克隆和蛋白表达系统介绍 | 第19页 |
| ·重组质粒的构建 | 第19-21页 |
| ·重组质粒的初步筛选 | 第21-22页 |
| ·测序确认 | 第22页 |
| ·提取重组质粒 | 第22-23页 |
| ·LR 反应 | 第23-24页 |
| ·兔NRDR在BL21-AITM细胞中的表达及性质鉴定 | 第24-29页 |
| ·试剂的配制 | 第24-26页 |
| ·诱导表达 | 第26页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第26-27页 |
| ·SDS 蛋白电泳 | 第27页 |
| ·在340nm 下监测NADPH 的消耗 | 第27-28页 |
| ·重组 Rabbit-NRDR 的纯化 | 第28-29页 |
| ·纯化重组蛋白的保存 | 第29页 |
| ·利用反相HPLC 对Rabbit-NRDR 进行酶动力学研究 | 第29-32页 |
| ·反相高压液相色谱法检测条件 | 第29页 |
| ·流动相的配制 | 第29-30页 |
| ·维生素K3的浓度梯度的建立 | 第30页 |
| ·增溶剂 SDS 的使用 | 第30页 |
| ·密闭反应体系的建立 | 第30-31页 |
| ·表达纯化蛋白活性 Km 值的测定 | 第31-32页 |
| ·产物的鉴定 | 第32-33页 |
| 结果 | 第33-40页 |
| 1 Rabbit-NRDR 重组蛋白表达载体的确认 | 第33页 |
| ·菌落 PCR 确认入门克隆 | 第33页 |
| ·测序确认 NRDR 全长序列 | 第33页 |
| ·菌落PCR 确认表达克隆 | 第33页 |
| 2 Rabbit-NRDR 在BL21-AITM 细胞中的表达 | 第33-34页 |
| 3 Rabbit-NRDR 表达蛋白的纯化、蛋白浓度测定及活性测定 | 第34-38页 |
| ·Rabbit-NRDR 表达蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·利用HPLC 分析Rabbit-NRDR 对维生素K3 的还原活性 | 第34-37页 |
| ·Km 值测定 | 第37-38页 |
| 4 Rabbit-NRDR 对维生素K3 还原产物的鉴定 | 第38-40页 |
| 讨论 | 第40-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 个人简历 | 第51页 |
