| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-43页 |
| 1 引言 | 第14-15页 |
| 2 抗病基因研究进展 | 第15-40页 |
| ·基因对基因假说 | 第15-17页 |
| ·植物抗病基因 | 第17-24页 |
| ·已克隆的植物抗病基因 | 第17-19页 |
| ·植物抗病基因的结构、功能与分类 | 第19-22页 |
| ·植物抗病基因的起源与进化 | 第22-24页 |
| ·病原微生物的无毒基因 | 第24-26页 |
| ·植物抗病性及其信号传导途径 | 第26-33页 |
| ·植物抗病性反应 | 第26-27页 |
| ·植物抗病信号传导途径 | 第27-33页 |
| ·植物抗病相关基因克隆方法 | 第33-36页 |
| ·图位克隆法(或定位克隆技术) | 第34页 |
| ·转座子标签法 | 第34页 |
| ·抗病基因同源序列克隆法 | 第34-35页 |
| ·本研究中采用的基因克隆方法—RGA-RACE技术 | 第35-36页 |
| ·植物抗病基因类似物(RGA)研究进展 | 第36-38页 |
| ·已克隆的植物抗病基因类似物序列 | 第36-38页 |
| ·植物抗病基因类似物的应用现状 | 第38页 |
| ·甘薯基因克隆研究进展 | 第38-40页 |
| ·品质相关基因 | 第39页 |
| ·块根发育相关基因 | 第39页 |
| ·抗逆相关基因 | 第39-40页 |
| 3 本课题的研究目的、意义和主要研究内容 | 第40-43页 |
| ·选题的依据及研究的目的和意义 | 第40-41页 |
| ·主要研究内容 | 第41-42页 |
| ·甘薯及三浅裂野牵牛RGA序列的分离及分析 | 第41页 |
| ·甘薯NBS-LRR抗病相关基因的全长cDNA的克隆 | 第41页 |
| ·甘薯NPR1基因的全长cDNA的克隆 | 第41页 |
| ·甘薯抗病相关基因真核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·研究的技术路线 | 第42-43页 |
| 第二章 甘薯及三浅裂野牵牛NBS类RGAs的分离研究 | 第43-64页 |
| 1.材料与方法 | 第43-49页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·供试菌种和质粒 | 第43页 |
| ·引物设计 | 第43-44页 |
| ·主要分子生物学及生化试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-49页 |
| ·基因组总DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·甘薯抗病基因类似物PCR扩增 | 第45页 |
| ·甘薯抗病基因类似物PCR产物目的片段回收 | 第45-46页 |
| ·甘薯抗病基因类似物PCR产物目的片段克隆 | 第46-48页 |
| ·甘薯抗病基因类似物PCR产物的序列测定 | 第48页 |
| ·甘薯抗病基因类似物多样性及进化关系分析 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-61页 |
| ·甘薯及三浅裂野牵牛NBS类RGA的分离与鉴定 | 第49-50页 |
| ·甘薯及三浅裂野牵牛RGA序列的聚类分析 | 第50-56页 |
| ·甘薯及三浅裂野牵牛NBS类RGAs氨基酸序列的比较分析 | 第56-58页 |
| ·甘薯及三浅裂野牵牛NBS类抗病基因密码子的碱基组成 | 第58页 |
| ·甘薯及三浅裂野牵牛NBS类RGA的密码子使用 | 第58-61页 |
| 3 讨论 | 第61-64页 |
| ·甘薯及三浅裂野牵牛RGAs的分离与鉴定 | 第61页 |
| ·甘薯及三浅裂野牵牛RGAs的序列密码子的使用 | 第61-62页 |
| ·甘薯及三浅裂野牵牛RGAs的多样性、起源及进化关系分析 | 第62-64页 |
| 第三章 甘薯抗病相关基因SPR1的克隆 | 第64-88页 |
| 1 材料与方法 | 第64-75页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·植物材料 | 第64-65页 |
| ·菌种及载体 | 第65页 |
| ·试剂、试剂盒及酶 | 第65页 |
| ·引物 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-75页 |
| ·甘薯叶片总RNA的提取 | 第65-66页 |
| ·甘薯基因组DNA的提取 | 第66页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因片段 | 第66-67页 |
| ·目的片段回收、连接与转化 | 第67页 |
| ·cDNA全长的RACE扩增 | 第67-70页 |
| ·目的基因cDNA全长的RT-PCR扩增 | 第70-71页 |
| ·目的片段回收、连接与转化 | 第71页 |
| ·甘薯SPR1基因的Southern杂交 | 第71-73页 |
| ·基因测序和序列的比对、分析 | 第73页 |
| ·目的基因的器官特异性表达检测 | 第73页 |
| ·目的基因的部分甘薯主栽品种的PCR检测 | 第73页 |
| ·SPR1基因真核表达载体构建 | 第73-75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-84页 |
| ·甘薯总RNA完整性及纯度检测 | 第75页 |
| ·目的基因部分编码区的获得 | 第75页 |
| ·目的基因3′端和5′端的获得 | 第75-76页 |
| ·目的基因编码区的扩增 | 第76-78页 |
| ·甘薯SPR1基因编码蛋白产物的结构分析及功能预测 | 第78-81页 |
| ·甘薯SPR1基因编码蛋白质氨基酸结构分析 | 第78-80页 |
| ·甘薯SPR1基因编码蛋白质产物的疏水性分析 | 第80页 |
| ·甘薯SPR1基因编码蛋白质产物的二级结构分析 | 第80-81页 |
| ·甘薯SPR1基因编码蛋白质产物的功能预测 | 第81页 |
| ·甘薯SPR1基因编码产物的同源性比较 | 第81-82页 |
| ·甘薯SPR1基因的Southern杂交分析 | 第82-83页 |
| ·甘薯SPR1基因器官特异性检测 | 第83页 |
| ·甘薯SPR1基因在其他甘薯品种基因组中的PCR扩增 | 第83页 |
| ·甘薯SPR1基因真核表达载体的构建 | 第83-84页 |
| 3 讨论 | 第84-88页 |
| 第四章 甘薯病程相关非表达子1(NPR1)基因的克隆 | 第88-111页 |
| 1 材料与方法 | 第88-95页 |
| ·材料 | 第88-90页 |
| ·植物材料 | 第88-89页 |
| ·菌种及载体 | 第89页 |
| ·试剂、试剂盒及酶 | 第89页 |
| ·引物 | 第89-90页 |
| ·方法 | 第90-95页 |
| ·甘薯NPR1基因DNA片段的PCR扩增 | 第90页 |
| ·甘薯NPR1基因cDNA片段的PCR扩增 | 第90-91页 |
| ·cDNA全长的RACE扩增 | 第91页 |
| ·目的基因cDNA全长的RT-PCR扩增 | 第91-92页 |
| ·NPR1基因的Southern杂交分析 | 第92页 |
| ·半定量RT-PCR法检测甘薯NPR1基因的转录表达 | 第92-93页 |
| ·NPR1基因真核表达载体构建 | 第93-95页 |
| 2 结果与分析 | 第95-108页 |
| ·目的基因部分编码区的获得 | 第95-96页 |
| ·目的基因3’端和5’端的获得 | 第96页 |
| ·甘薯NPR1基因编码区的扩增 | 第96-98页 |
| ·甘薯NPR1基因核苷酸序列分析 | 第98-99页 |
| ·甘薯NPR1基因氨基酸序列分析 | 第99-103页 |
| ·甘薯NPR1基因蛋白结构分析 | 第103-104页 |
| ·甘薯NPR1基因编码蛋白的疏水性分析 | 第103页 |
| ·甘薯NPR1基因编码蛋白的二级结构分析 | 第103-104页 |
| ·甘薯NPR1基因系统进化分析 | 第104页 |
| ·甘薯NPR1基因的转录表达检测 | 第104-107页 |
| ·NPR1基因半定量RT-PCR检测体系的建立 | 第104-106页 |
| ·甘薯NPR1基因转录表达检测 | 第106页 |
| ·甘薯NPR1基因器官特异性检测 | 第106-107页 |
| ·NPR1基因甘薯基因组中的拷贝数分析 | 第107页 |
| ·甘薯NPR1基因在不同甘薯品种中的PCR扩增 | 第107-108页 |
| ·NPR1基因真核表达载体的构建 | 第108页 |
| 3 讨论 | 第108-111页 |
| 第五章 全文结论及后续工作 | 第111-114页 |
| 1 全文结论 | 第111-112页 |
| 2.关于后续工作 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-137页 |
| 附录A 在GeBank登录的序列 | 第137-145页 |
| 附录B 试验所用部分试剂配方 | 第145-147页 |
| 附录C 甘薯NPR1蛋白四级结构3D图 | 第147-148页 |
| 附录D 缩略词 | 第148-150页 |
| 附录E 在学期间发表文章 | 第150-151页 |
| 致谢 | 第151页 |
