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胆汁中33.5kDa泡相蛋白的分离纯化

缩略词第1-8页
中文摘要第8-9页
Abstract第9-10页
第一部分 前言第10-25页
 1.胆囊第11页
   ·胆囊的功能第11页
   ·胆汁第11页
 2.胆石症的概况第11-14页
   ·胆石症的现状第11-12页
   ·胆结石的分类第12页
   ·引发胆石症的因素第12-13页
   ·胆石症的临床表现第13页
   ·胆结石的诊断第13-14页
   ·胆结石病的危害性第14页
 3.胆石症的治疗第14页
 4.胆固醇结石的成因第14-17页
 5.胆汁成核效应蛋白的研究进展第17-20页
   ·促成核蛋白第18-20页
   ·抑制成核蛋白第20页
 6.单克隆抗体的应用第20-21页
   ·单克隆抗体的特点第20-21页
   ·单克隆抗体在医学检验上的应用第21页
   ·单克隆抗体在临床治疗上的应用第21页
   ·国内外单抗研究现状第21页
 7.ELISA诊断方法的原理及研究进展第21-22页
   ·EIA的特点与发展趋势第22页
   ·ELISA的原理第22页
   ·ELISA的应用第22页
 8.免疫胶体金技术的基本原理第22-23页
 9.课题意义及目的第23-25页
第二部分 实验部分第25-34页
 1.实验材料第25页
   ·原料第25页
   ·模拟胆汁的配制原料第25页
   ·其他试剂第25页
   ·仪器与设备第25页
   ·计算机分析软件第25页
 2.实验主要试剂的配制第25-30页
   ·不同pH的不同浓度的磷酸缓冲液的配制第25-26页
   ·不同浓度pH3.0甘氨酸-盐酸缓冲液的配制第26页
   ·不同浓度pH5.0醋酸-醋酸钠缓冲液的配制第26页
   ·不同浓度pH9.0甘氨酸-氢氧化钠缓冲液的配制第26页
   ·含150mmol/LNaCl的20mmol/L Tris-HCl的pH7.4 TBS的配制第26页
   ·10mmol/L STDC-TBS溶液的配制第26-27页
   ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳相关溶液的配制第27-29页
     ·储存液的配制第27页
     ·工作液的配制第27-28页
     ·染色液第28页
     ·配制X%分离胶(总体积10ml)第28页
     ·配制5%浓缩胶第28-29页
     ·样品处理及上样第29页
     ·电泳第29页
   ·模拟胆汁的配制第29-30页
     ·所需材料第29-30页
     ·计算各物质量第30页
     ·材料的处理第30页
     ·模拟胆汁的配制第30页
 3.离子交换柱分离蛋白第30-31页
 4.疏水层析法分离蛋白第31页
 5.分子筛层析法分离蛋白第31-32页
 6.RP-HPLC的使用第32-34页
第三部分 结果与分析第34-51页
 1.层析条件的选择第34-46页
   ·离子交换层析填料的选择第34-37页
     ·CM-Sephadex C-50处理pH3、pH5的样品第34-35页
     ·CM-Sephadex C-50处理pH7、pH9的样品第35-36页
     ·QAE-Sephadex A-25处理pH3、pH5的样品第36页
     ·QAE-Sephadex A-25处理pH7、pH9的样品第36-37页
     ·离子交换层析结果分析第37页
   ·分析调pH到3的透析后胆汁上清和沉淀第37-42页
     ·调过pH后的上清进行阳离子交换实验的结果第37-38页
     ·调pH到3后沉淀部分进行分析的结果第38-39页
     ·调pH到3后沉淀部分在缓冲液中溶解情况的分析第39-40页
     ·调pH到3后沉淀部分在TBS缓冲液中溶解情况的分析第40-41页
     ·用5mM pH3 Gly-HCl溶解调胆汁pH值到3后的沉淀进行疏水层析第41页
     ·用CM-Sephadex C-50处理调胆汁pH值到3产生的沉淀第41-42页
   ·对于胆汁中胆色素的处理第42-44页
     ·调不同oH值检查胆色素的沉淀效果第42-43页
     ·Sephadex G-25分离处理的胆汁样品第43-44页
     ·重复验证Sephadex G-25分离处理的胆汁样品结果第44页
   ·分析不同填料上样后平衡时洗出的蛋白第44-46页
     ·阳离子交换填料CM-Sephadex C-50上样后平衡时洗出的蛋白第44-45页
     ·疏水填料Phenyl Sepharose Fast Flow上样后平衡时洗出的蛋白第45-46页
     ·kDa泡相蛋白的活性测定第46-48页
   ·第一次活性测定第46页
   ·第二次活性测定第46-47页
   ·第三次活性测定第47-48页
 3.模拟胆汁成核过程光镜观察结果第48页
 4.分子筛层析后所得纯化物HPLC纯度分析第48-51页
   ·梯度洗脱第48-49页
   ·恒浓度洗脱第49-51页
     ·60%乙腈浓度洗脱第49页
     ·50%乙腈浓度洗脱第49-51页
第四部分 总结第51-52页
参考文献第52-55页
致谢第55页

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