| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 符号及缩写说明 | 第9-14页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 文献综述 | 第15-37页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征及猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展 | 第15-30页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征流行历史及危害概述 | 第15-16页 |
| ·北美 | 第15页 |
| ·欧洲 | 第15页 |
| ·亚洲 | 第15页 |
| ·中国 | 第15-16页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病原学研究进展 | 第16-17页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒的分类地位 | 第16页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒的形态和理化特性 | 第16-17页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征流行病学研究进展 | 第17-23页 |
| ·流行病学特性 | 第17-21页 |
| ·传染源 | 第17-18页 |
| ·传播途径及传播方式 | 第18-19页 |
| ·流行规律 | 第19页 |
| ·流行动态 | 第19-21页 |
| ·感染与继发感染 | 第21页 |
| ·持续性感染与隐性感染 | 第21页 |
| ·国内外流行形势 | 第21-22页 |
| ·目前该病具有的流行特点 | 第22-23页 |
| ·感染率高 | 第22页 |
| ·临床症状趋于复杂 | 第22-23页 |
| ·种猪带毒与母猪发情障碍 | 第23页 |
| ·免疫抑制 | 第23页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 | 第23-27页 |
| ·PRRSV基因组结构 | 第23-24页 |
| ·PRRSV基因的变异和重组 | 第24-25页 |
| ·PRRSV基因组的转录及表达 | 第25页 |
| ·PRRSV基因组所编码的蛋白 | 第25-27页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征免疫学研究进展 | 第27-30页 |
| ·致病机理 | 第27-28页 |
| ·PRRSV对免疫细胞的影响 | 第28页 |
| ·体液免疫 | 第28-29页 |
| ·细胞免疫 | 第29页 |
| ·细胞因子的产生及抗体依赖性增强作用(ADE) | 第29-30页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征诊断、检测及防制技术研究进展 | 第30-37页 |
| ·临床诊断 | 第30-31页 |
| ·诊断要点 | 第30页 |
| ·组织病理学检查 | 第30-31页 |
| ·实验室诊断与检测技术 | 第31-34页 |
| ·病原分离诊断 | 第31页 |
| ·血清学检测方法 | 第31-33页 |
| ·间接荧光抗体技术(IFA) | 第31-32页 |
| ·免疫过氧化物酶单层试验(IPMA) | 第32页 |
| ·血清中和试验(SN) | 第32页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第32-33页 |
| ·分子生物学检测技术 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第34页 |
| ·PRRS防制技术研究 | 第34-37页 |
| ·一般防制措施 | 第34-35页 |
| ·PRRS免疫预防疫苗研究 | 第35-37页 |
| 试验研究 | 第37-73页 |
| 第三章 我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学分析 | 第37-56页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·材料与方法 | 第37-45页 |
| ·病料来源 | 第37页 |
| ·主要仪器及设备 | 第37-38页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第38页 |
| ·细胞、载体及菌株 | 第38页 |
| ·质粒DNA提取用溶液 | 第38-39页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·病毒分离及培养 | 第39页 |
| ·分离毒株总RNA的提取 | 第39页 |
| ·RT-PCR | 第39-40页 |
| ·PCR扩增产物的凝胶电泳 | 第40-41页 |
| ·PCR产物回收 | 第41页 |
| ·目的基因的克隆、鉴定 | 第41-45页 |
| ·目的DNA片断与载体DNA的连接 | 第41-42页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·连接产物的转化 | 第43页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒DNA | 第43-44页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第44-45页 |
| ·目的基因序列测定及分析 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-53页 |
| ·疑似病料的病毒分离结果 | 第45页 |
| ·目的基因扩增、克隆及重组质粒酶切鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·分离毒株背景、ORF5基因序列测定与拼接结果 | 第46-47页 |
| ·分离毒株ORF5基因序列同源性分析 | 第47-49页 |
| ·推导分离毒株ORF5编码的氨基酸序列 | 第49-52页 |
| ·分离毒株ORF5基因进化树 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·不同病毒的分离培养特点 | 第53页 |
| ·PRRSV不同分离株ORF5基因遗传变异 | 第53-54页 |
| ·ORF5编码氨基酸中与毒力相关的氨基酸 | 第54页 |
| ·ORF5基因的遗传演化趋势 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第四章 PRRSV HN6株E蛋白基因在大肠杆菌中的表达 | 第56-73页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·材料 | 第56-60页 |
| ·病毒和阳性血清 | 第56页 |
| ·主要仪器与设备 | 第56-57页 |
| ·主要试剂与工具酶 | 第57页 |
| ·载体和菌株 | 第57页 |
| ·主要溶液配方 | 第57-60页 |
| ·方法 | 第60-67页 |
| ·RT-PCR | 第60-61页 |
| ·引物设计与合成 | 第60页 |
| ·病毒总RNA抽提 | 第60页 |
| ·反转录 | 第60页 |
| ·PCR反应 | 第60-61页 |
| ·目的基因的克隆 | 第61-62页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第62-64页 |
| ·阳性质粒和表达载体酶切回收 | 第62页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第62-63页 |
| ·BL21感受态细胞的制备 | 第63-64页 |
| ·连接产物的转化 | 第64页 |
| ·重组菌液及质粒的鉴定 | 第64页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第64-65页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第65页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第65页 |
| ·IPTG最佳诱导浓度的确定 | 第65页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第65页 |
| ·表达产物的检测 | 第65-67页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第65-66页 |
| ·Western blotting免疫印迹 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-69页 |
| ·目的基因片段的扩增 | 第67页 |
| ·重组质粒pMD-dORF5的鉴定 | 第67页 |
| ·重组质粒pET-dORF5的筛选与鉴定 | 第67-68页 |
| ·最佳诱导表达条件的确定 | 第68页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第68页 |
| ·Western blotting免疫印迹 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-72页 |
| ·目的蛋白的表达方案 | 第69-70页 |
| ·表达条件的优化 | 第70-71页 |
| ·表达产物抗原性检测 | 第71页 |
| ·该蛋白表达成功的意义 | 第71-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 全文总结 | 第73-74页 |
| 【参考文献】 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第82页 |
