| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 资源家系测定性状的英文缩写 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 引言 | 第13页 |
| 2 动物脂肪代谢机制 | 第13-19页 |
| ·脂肪细胞的形成及脂肪合成途径 | 第13-17页 |
| ·脂肪细胞的分化 | 第13-14页 |
| ·脂肪细胞分化的分子机制 | 第14页 |
| ·分化转录因子对脂肪细胞分化的影响 | 第14-15页 |
| ·其他对脂肪细胞分化可能有影响的基因 | 第15-16页 |
| ·脂肪合成的分子机制 | 第16-17页 |
| ·脂肪降解途径 | 第17-18页 |
| ·脂肪组织的其他功能 | 第18-19页 |
| 3 拟分离基因的研究现状 | 第19-22页 |
| ·PTP-1B(protein tyrosine phosphatese 1B) | 第19-21页 |
| ·AQP7(Aquaporin 7) | 第21-22页 |
| 4 本研究所使用的分子标记PCR-RFLP方法研究进展 | 第22-24页 |
| ·RFLP分子标记的介绍 | 第22-24页 |
| ·PCR-RFLP基本原理及优缺点 | 第22-23页 |
| ·几种改进的RFLP方法 | 第23-24页 |
| ·PCR-RFLP在猪育种中的应用及展望 | 第24页 |
| 5 Real-time quantitative PCR | 第24-26页 |
| ·实时荧光定量PCR技术原理 | 第25页 |
| ·两个重要概念 | 第25-26页 |
| ·应用 | 第26页 |
| 6 研究目的与意义 | 第26-28页 |
| 第二章 材料与试验方法 | 第28-58页 |
| 1 试验材料 | 第28-29页 |
| ·试验动物DNA样品 | 第28页 |
| ·试验动物组织样品 | 第28页 |
| ·主要仪器和设备 | 第28页 |
| ·主要药品及试剂 | 第28-29页 |
| ·缓冲液和常用试剂的配置 | 第29页 |
| 2 试验方法 | 第29-37页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·基因组DNA浓度的测定和质量检测 | 第30页 |
| ·猪脂肪沉积候选基因PTP-1B和AQP7基因cDNA序列的克隆、测序 | 第30-34页 |
| ·引物设计及合成 | 第30-31页 |
| ·猪各组织RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第31-32页 |
| ·总RNA的提取 | 第31页 |
| ·RNA完整性的检测 | 第31页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR方法扩增cDNA | 第32页 |
| ·RT-PCR反应 | 第32页 |
| ·RT-PCR反应产物的检测 | 第32页 |
| ·PCR产物回收、可隆、测序和生物信息学分析 | 第32-34页 |
| ·PCR产物的回收 | 第32-33页 |
| ·载体连接 | 第33页 |
| ·感受态细胞的制备(CaC12法制备感受态) | 第33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33页 |
| ·阳性克隆子的鉴定及测序 | 第33-34页 |
| ·生物信息学分析及相应软件 | 第34页 |
| ·猪脂肪沉积候选基因PTP-1B和AQP7基因组序列的克隆、测序 | 第34-36页 |
| ·引物设计 | 第34-35页 |
| ·PCR反应体系及条件 | 第35页 |
| ·基因多态性扫描和遗传方式分析 | 第35-36页 |
| ·多态性与性状的关联统计分析 | 第36页 |
| ·基因的组织表达研究 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-53页 |
| ·猪PTP-1B基因cDNA及部分基因组分离和克隆测序结果 | 第37-41页 |
| ·猪PTP-1B基因cDNA序列的克隆、测序 | 第37-41页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第37页 |
| ·PTP-1B部分基因组PCR结果 | 第37页 |
| ·大白、长白和梅山三个猪种基因组PCR产物克隆测序结果 | 第37-38页 |
| ·PTP-1B基因大白、长白和梅山三个猪种cDNA克隆和测序分析 | 第38-41页 |
| ·猪AQP7基因部分cDNA及部分基因组分离和克隆测序结果 | 第41-43页 |
| ·猪AQP7基因部分cDNAPCR扩增结果 | 第41页 |
| ·AQP7部分基因组PCR扩增结果 | 第41-42页 |
| ·AQP7基因大白、长白和梅山三个猪种cDNA克隆和测序分析 | 第42页 |
| ·AQP7基因不同品种猪基因组序列测序结果分析 | 第42-43页 |
| ·猪PTP-1B和AQP7基因多态性与猪脂肪沉积性状关联分析结果 | 第43-48页 |
| ·PTP-1B基因多态性与猪脂肪沉积性状关联分析结果 | 第43-46页 |
| ·PTP-1B基因酶切 | 第43-44页 |
| ·PCR—RFLP结果及基因型和等位基因频率 | 第44页 |
| ·猪PTP-1B基因PCR-Eco88I-RFLP基因型与性状的关联分析 | 第44-46页 |
| ·AQP7基因多态性与猪脂肪沉积性状关联分析结果 | 第46-48页 |
| ·AQP7基因酶切结果 | 第46-47页 |
| ·PCR—RFLP结果及基因型和等位基因频率 | 第47-48页 |
| ·猪AQP7基因PCR-PstI-RFLP基因型与性状的关联分析 | 第48页 |
| ·SYBR green Real-time PCR结果 | 第48-53页 |
| ·PTP-1B基因的表达 | 第48页 |
| ·AQP7基因的表达 | 第48-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| ·关于基因的SNPs检测及多态性与性状的关联分析 | 第53-54页 |
| ·基因SNPs的检测 | 第53页 |
| ·性状关联分析 | 第53-54页 |
| ·AQP7基因第4内含子的多态性 | 第53页 |
| ·PTP-1B基因第7内含子的多态性 | 第53-54页 |
| ·关于使用降落PCR(touchdown PCR,TD-PCR)扩增目的序列 | 第54-55页 |
| ·关于Real-time PCR | 第55-57页 |
| 5 小结 | 第57页 |
| 6 下一步工作 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
