| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-35页 |
| 第一节 水稻谷蛋白的研究进展 | 第15-21页 |
| ·水稻种子储藏蛋白的组成 | 第15-16页 |
| ·谷蛋白基因的克隆 | 第16页 |
| ·谷蛋白的表达调控 | 第16-17页 |
| ·谷蛋白合成加工分选及沉积 | 第17-18页 |
| ·谷蛋白突变体的研究进展 | 第18-21页 |
| 第二节 植物液泡加工酶的研究进展 | 第21-27页 |
| ·植物中VPE的分类 | 第21-22页 |
| ·VPE的活性 | 第22页 |
| ·VPE的生物合成 | 第22-23页 |
| ·VPE对种子储藏蛋白的加工是必需的 | 第23-24页 |
| ·VPE具有类似easpase-1活性 | 第24-25页 |
| ·VPE在衰老和胁迫条件下表达上调 | 第25-27页 |
| 第三节 小G蛋白家族中Rab亚家族的研究进展 | 第27-33页 |
| ·Rab蛋白的分子结构 | 第28-29页 |
| ·Rab蛋白的循环 | 第29-31页 |
| ·Rab蛋白的定位 | 第31页 |
| ·Rab蛋白参与囊泡运输 | 第31-33页 |
| 第四节 本研究的目的及意义 | 第33-35页 |
| 第二章 储藏蛋白突变体的筛选 | 第35-41页 |
| 1 材料与方法 | 第35-37页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·蛋白提取 | 第36页 |
| ·胶的配制 | 第36-37页 |
| ·电泳及胶的后续处理 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 一个水稻低谷蛋白基因Lgc的精细定位和分子标记辅助选择 | 第41-57页 |
| 1 材料和方法 | 第42-46页 |
| ·定位群体的构建 | 第42-43页 |
| ·蛋白的提取及表型的SDS-PAGE检测 | 第43页 |
| ·DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·SSR引物的设计 | 第44页 |
| ·SSR分析 | 第44页 |
| ·分子标记与目的基因的连锁分析 | 第44-45页 |
| ·分子标记辅助选择 | 第45页 |
| ·胚乳RNA的提取及鉴定 | 第45-46页 |
| ·半定量RT-PCR | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-52页 |
| ·表型鉴定与低谷蛋白特性的遗传分析 | 第46-47页 |
| ·突变基因初定位 | 第47页 |
| ·突变基因的精细定位 | 第47-48页 |
| ·GluB5基因在W3660中表达下调 | 第48-50页 |
| ·分子标记辅助选择 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-57页 |
| ·W3660突变基因的定位结果分析 | 第53-54页 |
| ·W3660和LGC-1是两个不同的突变体 | 第54页 |
| ·SSR标记应用于低谷蛋白品种辅助选择育种的前景 | 第54-57页 |
| 第四章 水稻液泡加工酶基因的图位克隆及功能鉴定 | 第57-81页 |
| 1 材料和方法 | 第59-65页 |
| ·植物材料和生长条件 | 第59页 |
| ·种子蛋白的提取及SDS-PAGE鉴定表型 | 第59-60页 |
| ·osVpe1的定位 | 第60页 |
| ·RNA的提取 | 第60-61页 |
| ·RT-PCR | 第61页 |
| ·osVpe1基因的克隆 | 第61页 |
| ·Southern杂交 | 第61-62页 |
| ·功能互补实验 | 第62-63页 |
| ·转基因后代的鉴定 | 第63页 |
| ·OsVPE1酶活性的测定 | 第63页 |
| ·亚细胞定位 | 第63-64页 |
| ·原核表达及蛋白纯化 | 第64页 |
| ·OsVPE1多克隆抗体的制备 | 第64-65页 |
| ·Western杂交 | 第65页 |
| 2 结果 | 第65-77页 |
| ·W379突变表型 | 第65-66页 |
| ·突变基因的遗传分析及精细定位 | 第66-70页 |
| ·候选基因的分离 | 第70页 |
| ·osVPE1活性的检测 | 第70-71页 |
| ·转基因互补实验 | 第71页 |
| ·Cys269对保持osVPE1的活性非常重要 | 第71-72页 |
| ·osVpe1的组织表达 | 第72-73页 |
| ·osVpe1及其相关基因在发育胚乳中的表达 | 第73-74页 |
| ·osVPE1的亚细胞定位 | 第74页 |
| ·Western blot分析 | 第74-76页 |
| ·osVPE1能够自我剪切成熟 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-81页 |
| ·osVPE1负责水稻种子中谷蛋白的剪切成熟 | 第77页 |
| ·Cys269对保持osVPE1活性是必要的 | 第77-78页 |
| ·Cys269的突变不改变其亚细胞定位 | 第78页 |
| ·osVPE1能够自我剪切成熟 | 第78-79页 |
| ·osVPE1(C269G)的剪切位置的变化使活性丧失 | 第79-81页 |
| 第五章 OsRab5a在水稻种子发育中起着重要的作用 | 第81-105页 |
| 1 材料和方法 | 第82-86页 |
| ·植物材料和生长条件 | 第82页 |
| ·各种生理生化指标的测定 | 第82-83页 |
| ·成熟种子断面的扫描电镜观察 | 第83-84页 |
| ·种子蛋白的提取及SDS-PAGE表型鉴定 | 第84页 |
| ·突变基因的遗传分析 | 第84页 |
| ·突变基因的定位 | 第84页 |
| ·RNA的提取 | 第84-85页 |
| ·RT-PCR | 第85页 |
| ·osRab5a cDNA及其启动子序列的克隆 | 第85-86页 |
| ·体外表达实验 | 第86页 |
| ·转基因载体的构建 | 第86页 |
| ·基因芯片的研究 | 第86页 |
| 2 结果 | 第86-102页 |
| ·Q4041的表型 | 第86-87页 |
| ·Q4041部分生理生化性状的测定 | 第87-88页 |
| ·成熟种子的SEM分析 | 第88-89页 |
| ·突变体与野生型发育胚乳中部分基因的表达 | 第89页 |
| ·突变基因的遗传分析 | 第89页 |
| ·Q4041突变基因的精细定位 | 第89-91页 |
| ·osRab5a的克隆 | 第91-93页 |
| ·osRab5a属于小G蛋白的Rab家族 | 第93-94页 |
| ·载体的构建 | 第94-95页 |
| ·osRab5a的体外表达及纯化 | 第95-96页 |
| ·基因芯片的研究 | 第96-102页 |
| 3.讨论 | 第102-105页 |
| ·osRab5a基因的克隆 | 第102页 |
| ·osRab5a参与蛋白向PSV的运输 | 第102-103页 |
| ·osRab5a的突变影响了淀粉的合成和积累 | 第103页 |
| ·进一步的工作 | 第103-105页 |
| 第六章 全文结论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 附件一 部分实验方法汇总 | 第117-130页 |
| 附件二 基因芯片部分分析数据 | 第130-138页 |
| 在读期间发表论文 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
