蚓激酶基因在毕赤酵母中的表达
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-20页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第8-15页 |
| ·背景概述 | 第8-9页 |
| ·毕赤酵母的甲醇代谢 | 第9页 |
| ·毕赤酵母表达体系 | 第9-10页 |
| ·选择标记 | 第10页 |
| ·蛋白降解酶的控制 | 第10-13页 |
| ·基因剂量 | 第13页 |
| ·重组蛋白翻译后的修饰 | 第13-15页 |
| ·蚓激酶研究进展 | 第15-19页 |
| ·概述 | 第15-16页 |
| ·蚓激酶的生理学特征 | 第16-17页 |
| ·蚓激酶的临床应用 | 第17-18页 |
| ·蚓激酶的基因工程重组 | 第18-19页 |
| ·本文研究内容与意义 | 第19-20页 |
| ·研究内容 | 第19页 |
| ·研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 毕赤酵母表达载体的构建 | 第20-27页 |
| ·实验准备 | 第20-21页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·试剂与培养基 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·引物设计 | 第21-22页 |
| ·质粒的提取 | 第22页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第22-23页 |
| ·PCR产物连接到载体 | 第23-24页 |
| ·转化大肠杆菌扩增表达载体 | 第24页 |
| ·表达载体的酶切验证 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-27页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第25页 |
| ·表达载体的酶切验证 | 第25-27页 |
| 第三章 毕赤酵母的电击转化与筛选 | 第27-37页 |
| ·实验准备 | 第27-29页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·试剂及培养基 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第29页 |
| ·转化子的筛选 | 第29-30页 |
| ·酵母菌落PCR筛选阳性克隆 | 第30页 |
| ·毕赤酵母总RNA提取 | 第30-31页 |
| ·Northern Dot Blotting | 第31-34页 |
| ·结果讨论 | 第34-37页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第34页 |
| ·菌落PCR筛选效果 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母总RNA提取 | 第35-36页 |
| ·Northern dot blotting | 第36-37页 |
| 第四章 蚓激酶在毕赤酵母中的表达及产物检测 | 第37-44页 |
| ·实验准备 | 第37-38页 |
| ·试剂与培养基 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-41页 |
| ·甲醇利用表型的检测 | 第38页 |
| ·Muts的分泌表达 | 第38-39页 |
| ·发酵上清液中蛋白的提取 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳 | 第39-40页 |
| ·纤维蛋白平板检验生物活性 | 第40-41页 |
| ·实验结果与分析 | 第41-44页 |
| ·甲醇利用表型的检测 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳结果 | 第41-42页 |
| ·纤维蛋白平板溶圈分析 | 第42-44页 |
| 第五章 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
