| 目录 | 第1-6页 |
| 图表目录 | 第6-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文略语表 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 第一部分 构建含有WNT信号通路应答元件的质粒 | 第18-32页 |
| 1 实验材料 | 第18-21页 |
| ·质粒 | 第18-19页 |
| ·菌株 | 第19页 |
| ·工具酶、酶切缓冲液及 DNA Marker | 第19页 |
| ·主要化学试剂 | 第19页 |
| ·试剂盒 | 第19页 |
| ·主要仪器及设备 | 第19-20页 |
| ·E.coli用培养基的配制 | 第20页 |
| ·主要溶液配方 | 第20-21页 |
| ·制备感受态细胞相关溶液 | 第20页 |
| ·抗生素的配制 | 第20页 |
| ·大量提取质粒 DNA的相关溶液 | 第20-21页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳缓冲液及凝胶的配制 | 第21页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-26页 |
| ·单链复性 | 第21-22页 |
| ·酶切消化 | 第22页 |
| ·连接 | 第22-23页 |
| ·转化 | 第23页 |
| ·鉴定 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·质粒 DNA的小提 | 第24-25页 |
| ·质粒 DNA的大量提取 | 第25-26页 |
| ·重组质粒 DNA浓度的测定 | 第26页 |
| ·DNA的纯化回收 | 第26页 |
| 3 实验结果 | 第26-32页 |
| ·确定并合成 Topflash单链 | 第26-27页 |
| ·单链复性 | 第27页 |
| ·反复插入Topflash序列，构建克隆 | 第27页 |
| ·检测 | 第27-30页 |
| ·质粒大提 | 第30页 |
| ·质粒线性化并回收线性化的 DNA | 第30-32页 |
| 第二部分 构建 WNT信号通路有关的药物筛选细胞模型 | 第32-51页 |
| 4 实验材料 | 第32-33页 |
| ·细胞用培养基及血清 | 第32页 |
| ·氯化锂(LiCl)溶液的配制 | 第32页 |
| ·佛波酯(TPA)溶液的配制 | 第32页 |
| ·其它试剂 | 第32页 |
| ·细胞培养用耗材 | 第32-33页 |
| ·所用仪器及设备 | 第33页 |
| ·细胞冻存液的配制 | 第33页 |
| ·细胞裂解液的配制 | 第33页 |
| 5 实验方法 | 第33-35页 |
| ·预实验:瞬时转染 Topflash报告基因质粒的细胞，对刺激的敏感性 | 第33-34页 |
| ·恒定表达细胞株的构建 | 第34页 |
| ·细胞冻存 | 第34页 |
| ·细胞复苏 | 第34-35页 |
| ·细胞裂解 | 第35页 |
| 6 实验结果 | 第35-51页 |
| ·预实验结果:瞬时转染的细胞对氯化锂刺激的反应性 | 第35-36页 |
| ·瞬时转染 | 第35页 |
| ·不同浓度的氯化锂溶液刺激 | 第35-36页 |
| ·挑选细胞单克隆 | 第36页 |
| ·利用荧光显微镜进行第一次筛查 | 第36-37页 |
| ·利用流式细胞术进行第二次筛查 | 第37页 |
| ·再次利用流式细胞术进行第三次筛查 | 第37-38页 |
| ·细胞的冻存 | 第38页 |
| ·通过反复传代检测细胞株的稳定性 | 第38-41页 |
| ·反复传代后通过荧光显微镜进行检测 | 第38-41页 |
| ·反复传代后通过流式细胞术进行检测 | 第41页 |
| ·通过细胞的冻存与复苏检测细胞株的稳定性 | 第41页 |
| ·通过荧光分光光度计测定细胞模型的 EC50 | 第41-48页 |
| ·药物筛选细胞模型的适用性(一)——佛波酯激活WNT通路 | 第48-49页 |
| ·佛波酯(TPA)对WNT通路的作用 | 第48页 |
| ·加入细胞，检测 TPA对筛选细胞模型的影响 | 第48-49页 |
| ·药物筛选细胞模型的适用性(二)——化合物对WNT通路的影响 | 第49-50页 |
| ·化合物样品的准备 | 第49页 |
| ·细胞的准备 | 第49页 |
| ·加样检测 | 第49-50页 |
| ·药物筛选细胞模型的适用性(三)——寻找WNT抑制剂作为新的抗癌症药物 | 第50-51页 |
| ·候选药物 | 第50页 |
| ·实验准备 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-54页 |
| 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 第三部分 研究生期间其他主要研究工作 | 第63-64页 |
| 个人简历 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-69页 |
