| 独创性声明 | 第1页 |
| 论文使用授权的说明 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1.前言 | 第10-27页 |
| ·现已筛选到的农药降解菌(农药微生物降解的现状) | 第10-13页 |
| ·农药微生物降解的途径 | 第13-15页 |
| ·农药降解酶 | 第15-23页 |
| ·降解酶的特性 | 第15-16页 |
| ·有机磷农药降解酶的基因研究 | 第16-20页 |
| ·对有机磷农药降解酶的高效表达的研究 | 第20-21页 |
| ·有机磷降解菌及降解酶的应用 | 第21-23页 |
| ·农药微生物降解的研究趋向 | 第23-25页 |
| ·真菌对农药的降解 | 第23页 |
| ·实验室与生态系 | 第23页 |
| ·农药微生物降解的规律 | 第23-24页 |
| ·农药微生物降解的基因操作 | 第24页 |
| ·有机磷农药降解酶制剂 | 第24-25页 |
| ·存在的问题及展望 | 第25-27页 |
| ·构建“超级细菌” | 第25页 |
| ·原生质体融合 | 第25页 |
| ·降解酶或降解基因的改良 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-36页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·供试菌 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第27页 |
| ·聚丙烯酰胺电泳贮存液 | 第27-28页 |
| ·正常测活液 | 第28页 |
| ·降解酶的分离纯化 | 第28-30页 |
| ·细菌培养 | 第28页 |
| ·产酶曲线的测定 | 第28页 |
| ·降解酶位置的确定 | 第28-29页 |
| ·最适酶盐析硫酸铵饱和度的确立 | 第29页 |
| ·SephadexG-100柱层析 | 第29页 |
| ·PAGE非变性胶电泳检测粗酶液 | 第29-30页 |
| ·DEAE-52柱层析 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE确定降解酶的分子量 | 第30页 |
| ·酶蛋白N末端氨基酸残基序列测定 | 第30页 |
| ·酶蛋白N末端氨基酸残基序列的比对 | 第30页 |
| ·降解酶特性研究 | 第30-33页 |
| ·对硝基苯酚标准曲线的制作 | 第30-31页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第31页 |
| ·、3 反应时间对产物生成量的影响 | 第31页 |
| ·酶浓度与酶活力的关系 | 第31-32页 |
| ·pH对甲基对硫磷降解酶的影响及酸碱稳定性 | 第32页 |
| ·温度对甲基对硫磷降解酶的影响及酶的热稳定性 | 第32页 |
| ·EDTA、Tween和金属离子对甲基对硫磷降解酶的影响 | 第32页 |
| ·有机溶剂对酶活的影响 | 第32-33页 |
| ·甲基对硫磷降解酶活性的动力学常数测定 | 第33页 |
| ·基因克隆 | 第33-36页 |
| ·JS018菌基因组DNA的提取 | 第33页 |
| ·简并引物的设计 | 第33页 |
| ·简并引物PCR扩增及其条件优化 | 第33-34页 |
| ·PCR产物的回收 | 第34页 |
| ·回收产物的纯化,测序及验证 | 第34-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-57页 |
| ·降解酶的分离纯化 | 第36-42页 |
| ·JS018菌在牛肉膏培养基的产酶曲线 | 第36页 |
| ·降解酶在细胞的位置 | 第36-37页 |
| ·最适盐析硫酸铵饱和度确定 | 第37页 |
| ·Sephadex G-100柱层析 | 第37-38页 |
| ·PAGE电泳确定分离目的蛋白 | 第38页 |
| ·DEAE-52柱层析及酶N末端氨基酸残基序列测定 | 第38-40页 |
| ·SDS-PAGE电泳确定分子量 | 第40-41页 |
| ·有机磷农药降解酶的聚类分析 | 第41-42页 |
| ·降解酶特性研究 | 第42-53页 |
| ·对硝基苯酚标准曲线的制作 | 第42-43页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第43-44页 |
| ·反应时间对产物生成量的影响 | 第44-45页 |
| ·酶浓度与酶活力的关系 | 第45-46页 |
| ·EDTA和Tween对酶活的影响 | 第46-47页 |
| ·pH对甲基对硫磷降解酶的影响及酶的酸碱稳定性 | 第47-49页 |
| ·温度对甲基对硫磷降解酶的影响及酶的热稳定性 | 第49-50页 |
| ·有机溶剂对酶活的影响 | 第50-51页 |
| ·不同离子对JS018菌降解酶活性的影响 | 第51页 |
| ·甲基对硫磷降解酶降解甲基对硫磷的常数测定 | 第51-53页 |
| ·基因克隆 | 第53-54页 |
| ·基因组DNA | 第53页 |
| ·简并引物 | 第53页 |
| ·简并引物PCR | 第53-54页 |
| ·T-克隆 | 第54-57页 |
| 4 总结与讨论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72页 |