灭活原生质体融合法在蛹虫草优良菌株选育中的应用
| 独创性声明 | 第1页 |
| 学位论文使用授权书 | 第2-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 一 绪论 | 第7-19页 |
| 1 蛹虫草的生物学特性 | 第7-9页 |
| ·地理分布 | 第7页 |
| ·形态结构 | 第7-8页 |
| ·无性型阶段 | 第7-8页 |
| ·有性型阶段 | 第8页 |
| ·生活史 | 第8页 |
| ·自然生境 | 第8-9页 |
| 2 蛹虫草的人工培养技术 | 第9-10页 |
| ·人工培养基质与管理措施 | 第9-10页 |
| ·培养基质 | 第9页 |
| ·培养管理 | 第9-10页 |
| ·深层发酵 | 第10页 |
| 3. 蛹虫草的活性成分及分析 | 第10-15页 |
| ·主要活性成分及功效 | 第12-13页 |
| ·虫草素的提取及测定 | 第13-15页 |
| ·虫草素的提取 | 第13-14页 |
| ·虫草素的测定 | 第14-15页 |
| 4. 蛹虫草的育种 | 第15-18页 |
| ·原生质体技术在食药用菌育种中的运用 | 第15-16页 |
| ·融合子的鉴定 | 第16-18页 |
| ·生物学鉴定 | 第16页 |
| ·生化鉴定 | 第16-17页 |
| ·分子生物学鉴定 | 第17-18页 |
| 5 研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 二 材料与方法 | 第19-32页 |
| 1 试验材料 | 第19-24页 |
| ·供试菌株 | 第19-20页 |
| ·主要仪器及设备 | 第20页 |
| ·供试培养基 | 第20-21页 |
| ·试验试剂 | 第21-24页 |
| ·ISSR-PCR反应所用引物 | 第24页 |
| 2. 试验方法 | 第24-32页 |
| ·蛹虫草人工培养 | 第24-25页 |
| ·活性成分分析 | 第25-26页 |
| ·总糖和还原糖测定 | 第25-26页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)法测定核苷类物质含量 | 第26页 |
| ·灭活原生质体融合 | 第26-28页 |
| ·菌丝体培养 | 第26-27页 |
| ·酶解反应 | 第27页 |
| ·原生质体纯化及再生 | 第27页 |
| ·原生质体再生率的计算 | 第27页 |
| ·原生质体灭活方法 | 第27-28页 |
| ·酯酶同工酶分析 | 第28-29页 |
| ·样品处理 | 第28页 |
| ·凝胶制备 | 第28-29页 |
| ·点样 | 第29页 |
| ·电泳条件 | 第29页 |
| ·酯酶同工酶检测 | 第29页 |
| ·ISSR-PCR试验方法 | 第29-32页 |
| ·菌株总DNA提取 | 第29-30页 |
| ·PCR反应体系 | 第30页 |
| ·PCR反应程序 | 第30-31页 |
| ·电泳检测 | 第31-32页 |
| 三 结果与分析 | 第32-56页 |
| 1 亲本筛选 | 第32-38页 |
| ·9个供试菌株主要农艺性状 | 第32-33页 |
| ·胞内糖含量测定 | 第33-34页 |
| ·核苷类物质含量测定 | 第34-38页 |
| 2 灭活原生质体融合 | 第38-41页 |
| ·最佳酶解时间 | 第38-39页 |
| ·致死时间 | 第39-40页 |
| ·再生菌株的获得 | 第40-41页 |
| 3 酯酶同工酶酶谱及分析 | 第41-47页 |
| ·亲本菌株酯酶同工酶酶谱 | 第41-42页 |
| ·初筛菌株酯酶同工酶酶谱 | 第42-44页 |
| ·ISSR指纹图谱及分析 | 第44-47页 |
| ·ISSR引物筛选 | 第44-46页 |
| ·再生菌株 ISSR-PCR反应 | 第46-47页 |
| 4 初筛菌株核苷类物质含量 | 第47-50页 |
| 5 再生菌株人工培养情况 | 第50-52页 |
| 6 再生菌株遗传稳定性初步测试 | 第52-56页 |
| 四 讨论 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
